| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一部分 前言 | 第12-17页 |
| 1.1 细胞自噬概述 | 第12-13页 |
| 1.2 细胞自噬信号通路 | 第13-14页 |
| 1.3 细胞自噬相关基因 | 第14-15页 |
| 1.4 自噬相关基因Atg8及研究意义 | 第15-17页 |
| 第二部分 实验材料 | 第17-23页 |
| 2.1 细胞系以及培养基 | 第17页 |
| 2.2 质粒和菌株 | 第17页 |
| 2.3 主要药品与试剂 | 第17-18页 |
| 2.4 常用溶液以及培养基的配置 | 第18-21页 |
| 2.4.1 细胞及细菌常用培养基 | 第18-19页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE凝胶电泳相关溶液 | 第19-20页 |
| 2.4.3 Western Blot(免疫印迹)相关溶液 | 第20页 |
| 2.4.4 常用的溶液 | 第20页 |
| 2.4.5 SDS-PAGE凝胶的配置 | 第20-21页 |
| 2.4.6 Tricine-PAGE胶的配置 | 第21页 |
| 2.5 主要实验仪器及型号 | 第21-23页 |
| 第三部分 实验方法 | 第23-32页 |
| 3.1 真核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 3.2 氯化理法提质粒(1.5ML菌液) | 第24页 |
| 3.3 TRIZOL法从细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA | 第24-26页 |
| 3.3.1 Trizol法从细胞中提取总RNA的方法 | 第24-25页 |
| 3.3.2 去除基因组DNA | 第25页 |
| 3.3.3 逆转录合成cDNA | 第25-26页 |
| 3.4 免疫荧光检测ATG8在细胞内的定位 | 第26页 |
| 3.5 WESTEREN操作——半干转印操作 | 第26-27页 |
| 3.6 细胞的冻存与复苏 | 第27页 |
| 3.7 脂质体转染细胞 | 第27-28页 |
| 3.8 TRIZOL法提取组织蛋白 | 第28-29页 |
| 3.9 合成DSRNA | 第29-30页 |
| 3.10 RNA干扰后Atg8表达水平的检测 | 第30页 |
| 3.11 棉铃虫人工饲料配方 | 第30-31页 |
| 3.12 棉铃虫饲养方法 | 第31页 |
| 3.13 棉铃虫Atg8-DSRNA活体注射 | 第31-32页 |
| 第四部分 实验结果 | 第32-46页 |
| 4.1 Atg8融合蛋白表达载体的构建 | 第32-35页 |
| 4.1.1 pEGFP-N1-IE_2-EGFP-Atg8真核表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| 4.1.2 pEGFP-N1-IE_2-mCherry-EGFP-Atg8真核表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| 4.1.3 pEGFP-N1-IE_2-mCherry-Atg8真核表达质粒的构建 | 第34页 |
| 4.1.4 pEGFP-N1-IE_2-HA-Atg8真核表达质粒的构建 | 第34-35页 |
| 4.2 Atg8融合蛋白的定位 | 第35-36页 |
| 4.3 影响Atg8蛋白定位的关键氨基酸的确定 | 第36-39页 |
| 4.3.1 影响Atg8蛋白定位的突变质粒的构建 | 第36-37页 |
| 4.3.2 影响Atg8蛋白定位的关键氨基酸的确定 | 第37-39页 |
| 4.4 标签对ATG8蛋白加工的影响 | 第39页 |
| 4.5 Atg8融合蛋白的核质转运 | 第39-40页 |
| 4.6 不同载体表达的融合蛋白在细胞内的分布 | 第40-41页 |
| 4.7 研究Atg8蛋白与Atg6蛋白是否共定位 | 第41-42页 |
| 4.8 干扰棉铃虫Atg8对其生长发育的影响 | 第42-46页 |
| 4.8.1 棉铃虫Atg8蛋白各组织的差异表达 | 第42页 |
| 4.8.2 RNA干扰效果检测 | 第42-44页 |
| 4.8.3 Atg8被干扰后对棉铃虫成虫产卵量的影响 | 第44页 |
| 4.8.4 Atg8被干扰后对棉铃虫成虫产卵后孵化率的影响 | 第44-45页 |
| 4.8.5 Atg8被干扰后对棉铃虫幼虫体重的影响 | 第45-46页 |
| 第五部分 讨论 | 第46-49页 |
| 5.1 不同标签的Atg8融合蛋白的表达和定位 | 第46页 |
| 5.2 影响Atg8蛋白功能和定位的关键氨基酸 | 第46页 |
| 5.3 影响自噬的关键氨基酸 | 第46-47页 |
| 5.4 荧光标签蛋白彰响Atg8蛋白的剪切 | 第47页 |
| 5.5 EGFP-Atg8融合蛋白表达水平差异的机理 | 第47-48页 |
| 5.6 MCHERRY-Atg8融合蛋白的核质转运 | 第48页 |
| 5.7 HA标签对HA-Atg8蛋白加工的影响 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 附录 | 第51-53页 |
| 硕士期间发表论文 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
