| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 目次 | 第13-16页 |
| 第一部分 小鼠Cd3001f基因的克隆、原核表达及抗血清制备 | 第16-36页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 1 材料 | 第17-18页 |
| ·菌株、细胞、载体及实验动物 | 第17-18页 |
| ·主要实验试剂 | 第18页 |
| ·主要实验设备及仪器 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-25页 |
| ·小鼠BMDCs的制备 | 第18页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第18-19页 |
| ·小鼠Cd3001f基因的RT-PCR及回收 | 第19-20页 |
| ·小鼠Cd3001f基因的TA克隆及鉴定 | 第20-21页 |
| ·原核表达质粒pGEX-Cd3001f(22 aa-185 aa)的构建及鉴定 | 第21-22页 |
| ·GST-Cd3001f(22 aa-185 aa)融合蛋白的表达 | 第22-23页 |
| ·GST-Cd3001f(22 aa-185 aa)融合蛋白的纯化 | 第23页 |
| ·抗血清的制备 | 第23-24页 |
| ·抗血清特异性的检测 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-33页 |
| ·Cd3001f基因的扩增结果 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pMD-Cd3001f的鉴定结果 | 第26页 |
| ·Cd3001f基因序列同源性比对 | 第26-28页 |
| ·Cd3001f基因氨基酸序列分析及抗原性分析 | 第28-29页 |
| ·原核表达质粒pGEX-Cd3001f(22 aa-185 aa)的鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·GST-Cd3001f(22 aa-185 aa)融合蛋白的诱导表达结果 | 第30-31页 |
| ·GST-Cd3001f(22 aa-185 aa)融合蛋白的Westernblot分析结果 | 第31页 |
| ·GST-Cd3001f(22 aa-185 aa)融合蛋白的纯化结果 | 第31-32页 |
| ·抗血清抗体效价的测定结果 | 第32页 |
| ·抗血清的Western blot分析结果 | 第32页 |
| ·抗血清的ⅡFA分析结果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-36页 |
| 第二部分 小鼠Cd3001f基因表达及shRNA重组腺病毒载体的构建 | 第36-62页 |
| 前言 | 第36页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| ·菌株、细胞、载体及实验动物 | 第36页 |
| ·主要实验试剂 | 第36-37页 |
| ·主要实验设备及仪器 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-49页 |
| ·Cd3001f基因表达重组腺病毒的构建流程图 | 第37-39页 |
| ·Cd3001f基因shRAN重组腺病毒的构建流程图 | 第39-40页 |
| ·最佳沉默小鼠Cd3001f基因shRNA表达质粒载体的构建 | 第40-42页 |
| ·穿梭质粒载体的构建 | 第42-43页 |
| ·重组腺病毒载体的构建 | 第43-44页 |
| ·重组腺病毒的包装、收获及鉴定 | 第44-46页 |
| ·重组腺病毒的大量扩增 | 第46页 |
| ·重组腺病毒的纯化及滴度测定 | 第46-47页 |
| ·树突状细胞中Cd3001f基因表达mRNA的检测 | 第47-48页 |
| ·树突状细胞中Cd3001f基因表达蛋白的检测 | 第48页 |
| ·感染细胞表型及培养上清中细胞因子的检测 | 第48-49页 |
| ·统计学分析 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-58页 |
| ·小鼠Cd3001f基因shRNA表达质粒载体的鉴定结果 | 第49页 |
| ·最佳沉默小鼠Cd3001f基因shRNA表达质粒载体的筛选结果 | 第49-50页 |
| ·穿梭质粒载体的鉴定结果 | 第50-52页 |
| ·重组腺病毒载体的鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·重组腺病毒的包装结果 | 第53页 |
| ·重组腺病毒的鉴定结果 | 第53-54页 |
| ·重组腺病毒的滴度测定结果 | 第54-55页 |
| ·树突状细胞中Cd3001f基因mRNA的检测结果 | 第55-56页 |
| ·树突状细胞中Cd3001f蛋白表达的检测结果 | 第56页 |
| ·感染细胞表型检测结果 | 第56-57页 |
| ·感染细胞培养上清ELISA检测结果 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-62页 |
| 第三部分 Cd3001f基因修饰树突状细胞对哮喘小鼠气道炎症的作用研究 | 第62-80页 |
| 前言 | 第62页 |
| 1 材料 | 第62-63页 |
| ·实验动物 | 第62页 |
| ·主要实验试剂与材料 | 第62-63页 |
| ·主要实验设备及仪器 | 第63页 |
| 2 方法 | 第63-67页 |
| ·实验动物模型建立 | 第63页 |
| ·Cd3001f基因修饰树突状细胞的制备及实验动物分组 | 第63-64页 |
| ·气道高反应性检测 | 第64页 |
| ·动物处理、标本收集及处理 | 第64-65页 |
| ·BALF白细胞计数和分类 | 第65-66页 |
| ·肺组织病理学检查 | 第66页 |
| ·脾细胞培养 | 第66页 |
| ·BALF和脾细胞培养上清Th1/Th2细胞因子ELISA检测 | 第66页 |
| ·脾细胞Tregs流式检测 | 第66-67页 |
| ·脾细胞Th17流式检测 | 第67页 |
| ·统计学分析 | 第67页 |
| 3 结果 | 第67-76页 |
| ·Cd3001f基因沉默树突状细胞降低了哮喘小鼠气道高反应性 | 第67-69页 |
| ·Cd3001f基因沉默树突状细胞降低了哮喘小鼠气道白细胞总数及嗜酸性粒细胞数量 | 第69-70页 |
| ·Cd3001f基因沉默树突状细胞改善了哮喘小鼠肺组织损伤 | 第70-71页 |
| ·Cd3001f基因沉默树突状细胞降低了BALF中Th2细胞因子水平 | 第71-72页 |
| ·Cd3001f基因沉默树突状细胞降低了脾细胞培养上清中Th2细胞因子水平#57 | 第72-73页 |
| ·Cd3001f基因沉默树突状细胞上调了脾细胞中CD4~+Foxp3~+Tregs的比例 | 第73-75页 |
| ·Cd3001f基因沉默树突状细胞下调了脾细胞中CD4~+IL-17A~+Th17的比例 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 综述 | 第84-100页 |
| 参考文献 | 第95-100页 |
| 作者简历及在读期间所发表的论文 | 第100页 |
