| 学位论文数据集 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 符号说明 | 第20-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-31页 |
| 1.1 真菌在现代工业生产中的应用 | 第21-25页 |
| 1.1.1 工业微生物的发展及重要性 | 第21页 |
| 1.1.2 真菌在生物化工和生物医药中的重要性 | 第21页 |
| 1.1.3 丝状真菌在基因改造过程中的问题 | 第21-22页 |
| 1.1.4 巴斯德毕赤酵母 | 第22-23页 |
| 1.1.5 头孢菌素C | 第23页 |
| 1.1.6 顶头孢霉 | 第23-25页 |
| 1.2 内部核糖体进入位点(IRES) | 第25-26页 |
| 1.2.1 IRES的来源及功能 | 第25页 |
| 1.2.2 IRES的应用 | 第25-26页 |
| 1.3 透明颤菌血红蛋白 | 第26-27页 |
| 1.3.1 VHb的发现 | 第26页 |
| 1.3.2 VHb基因的应用 | 第26-27页 |
| 1.4 CPC酰化酶基因 | 第27页 |
| 1.5 根癌农杆菌介导的转化 | 第27-28页 |
| 1.5.1 根癌农杆菌介导转化的机制 | 第27-28页 |
| 1.5.2 根癌农杆菌介导的真菌转化 | 第28页 |
| 1.6 论文的研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 1.7 论文的研究内容 | 第29-31页 |
| 第二章 材料、试剂与方法 | 第31-39页 |
| 2.1 引论 | 第31页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第31-39页 |
| 2.2.1 质粒及菌株 | 第31-32页 |
| 2.2.2 培养基 | 第32-33页 |
| 2.2.3 抗生素 | 第33-34页 |
| 2.2.4 工具酶 | 第34-35页 |
| 2.2.5 试剂盒、常用试剂 | 第35页 |
| 2.2.6 仪器设备 | 第35页 |
| 2.2.7 生物化学及分子生物学方法 | 第35页 |
| 2.2.8 杯碟法分析法 | 第35-36页 |
| 2.2.9 高效毛细管电泳分析法 | 第36-37页 |
| 2.2.10 专业软件 | 第37-39页 |
| 第三章 IRES在毕赤酵母中的功能验证 | 第39-51页 |
| 3.1 引论 | 第39页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.1 质粒与菌株 | 第39页 |
| 3.2.2 培养基 | 第39-40页 |
| 3.2.3 酶与试剂盒 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-47页 |
| 3.3.1 用于毕赤酵母转化的重组质粒的构建 | 第40-43页 |
| 3.3.2 重组质粒pPIC02-vIh转化毕赤酵母 | 第43-47页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第47-50页 |
| 3.4.1 质粒pPIC02-vIh的菌落PCR验证实验结果 | 第47页 |
| 3.4.2 毕赤酵母重组菌的筛选及验证 | 第47-48页 |
| 3.4.3 毕赤酵母重组菌的蛋白表达 | 第48-49页 |
| 3.4.4 毕赤酵母重组菌外源基因稳定性的研究 | 第49-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 vgb基因对顶头孢霉的转化 | 第51-65页 |
| 4.1 引论 | 第51页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第51-52页 |
| 4.2.1 质粒与菌株 | 第51-52页 |
| 4.2.2 培养基 | 第52页 |
| 4.2.3 酶与试剂盒 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-58页 |
| 4.3.1 质粒pBI121-vIh的构建 | 第52-54页 |
| 4.3.2 质粒pBI121-vIh的验证 | 第54-56页 |
| 4.3.3 根癌农杆菌LBA4404的转化及验证 | 第56-57页 |
| 4.3.4 根癌农杆菌LBA4404对头孢噻肟钠敏感性研究 | 第57页 |
| 4.3.5 顶头孢霉对潮霉素B敏感性研究 | 第57页 |
| 4.3.6 根癌农杆菌介导的顶头孢霉的转化 | 第57-58页 |
| 4.3.7 顶头孢霉重组菌的验证 | 第58页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第58-64页 |
| 4.4.0 载体pBI121和质粒pDH25-vIh的双酶切结果 | 第58-59页 |
| 4.4.1 pBI121与片段第一次连接验证 | 第59页 |
| 4.4.2 重组质粒pBI121-vIh的菌落PCR验证 | 第59-60页 |
| 4.4.3 重组质粒pBI121-vIh的酶切验证 | 第60页 |
| 4.4.4 根癌农杆菌LBA4404对头孢噻肟钠敏感性研究结果 | 第60-61页 |
| 4.4.5 顶头孢霉对潮霉素B敏感性研究结果 | 第61-63页 |
| 4.4.6 三种共培养方式的转化结果 | 第63页 |
| 4.4.7 顶头孢霉重组菌的PCR验证 | 第63-64页 |
| 4.6 本章小结 | 第64-65页 |
| 第五章 顶头孢霉重组菌的初筛及耐氧性实验 | 第65-75页 |
| 5.1 引论 | 第65页 |
| 5.2 材料与试剂 | 第65-66页 |
| 5.2.1 菌株 | 第65页 |
| 5.2.2 培养基 | 第65页 |
| 5.2.3 试剂盒 | 第65-66页 |
| 5.3 实验方法 | 第66-68页 |
| 5.3.1 顶头孢霉重组菌的初步筛选 | 第66-67页 |
| 5.3.2 顶头孢霉重组菌在YPS培养基中发酵产物的分析 | 第67页 |
| 5.3.3 顶头孢霉重组菌在发酵培养基中发酵产物的分析 | 第67页 |
| 5.3.4 顶头孢霉重组菌外源基因的遗传稳定性研究 | 第67-68页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第68-72页 |
| 5.4.1 顶头孢霉重组菌的初步筛选 | 第68-69页 |
| 5.4.2 顶头孢霉在YPS培养基中的发酵 | 第69-70页 |
| 5.4.3 顶头孢霉在发酵培养基中的发酵 | 第70-72页 |
| 5.5 顶头孢霉重组菌外源基因稳定性的研究 | 第72-73页 |
| 5.6 本章小结 | 第73-75页 |
| 第六章 产7-氨基头孢烷酸的顶头孢霉菌株的初步构建 | 第75-91页 |
| 6.1 引论 | 第75页 |
| 6.2 材料与试剂 | 第75-76页 |
| 6.2.1 菌株 | 第75页 |
| 6.2.2 培养基 | 第75页 |
| 6.2.3 试剂盒 | 第75-76页 |
| 6.3 实验方法 | 第76-83页 |
| 6.3.1 双酶切法构建重组质粒pBI121-sCPCAcy-IRES-hph | 第76-78页 |
| 6.3.2 In-Fusion法构建重组质粒pBI121-sCPCAcy-IRES-hph | 第78-81页 |
| 6.3.3 Gibson法构建重组质粒pBI121-sCPCAcy-IRES-hph | 第81-83页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第83-89页 |
| 6.4.1 双酶切法构建重组质粒pBI121-sCPCAcy-IRES-hph | 第83-85页 |
| 6.4.2 In-Fusion法构建重组质粒pBI121-sCPCAcy-IRES-hph | 第85-87页 |
| 6.4.3 Gibson法构建重组质粒pBI121-sCPCAcy-IRES-hph | 第87-88页 |
| 6.4.4 几种连接方法的比较 | 第88-89页 |
| 6.5 本章小结 | 第89-91页 |
| 第七章 结论及展望 | 第91-93页 |
| 7.1 结论 | 第91-92页 |
| 7.2 展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-97页 |
| 附录 | 第97-105页 |
| 附录A 化学试剂及药品 | 第97-98页 |
| 附录B DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第98-99页 |
| 附录C 真菌基因组DNA提取方法 | 第99-100页 |
| 附录D 质粒或连接产物转化E.coli感受态细胞 | 第100-101页 |
| 附录E 大肠杆菌菌落PCR方法 | 第101-102页 |
| 附录F SDS聚丙烯酰胺蛋白电泳(SDS-PAGE) | 第102-103页 |
| 附录G 农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第107-109页 |
| 作者及导师简介 | 第109-110页 |
| 附件 | 第110-111页 |
