| 摘要 | 第5-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 符号说明 | 第14-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-48页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌及其致病性 | 第20-25页 |
| 1.1.1 金黄色葡萄球菌基本特征 | 第20-21页 |
| 1.1.2 食物中毒与感染性疾病 | 第21-23页 |
| 1.1.3 毒力因子及其致病特性 | 第23-25页 |
| 1.2 金黄色葡萄球菌毒力基因的表达调控 | 第25-31页 |
| 1.2.1 附属基因调节子 Agr（accessory gene regulator） | 第25-27页 |
| 1.2.2 金黄色葡萄球菌胞外蛋白表达调节子 Sae | 第27-28页 |
| 1.2.3 SarA（S. aureus accessory protein regulator）及其蛋白调控家族 | 第28-29页 |
| 1.2.4 σ~B调控因子 | 第29-31页 |
| 1.3 非特异核糖核酸酶 | 第31-43页 |
| 1.3.1 分布与定位 | 第33页 |
| 1.3.2 测定方法 | 第33-35页 |
| 1.3.3 催化反应特性 | 第35-38页 |
| 1.3.4 活性作用机制 | 第38-41页 |
| 1.3.5 生物功能 | 第41-43页 |
| 1.4 金黄色葡萄球菌耐热核酸酶 | 第43-44页 |
| 1.5 研究意义、目的和思路 | 第44-48页 |
| 1.5.1 研究意义、目的 | 第44-45页 |
| 1.5.2 研究思路 | 第45-48页 |
| 第二章 金黄色葡萄球菌两种耐热核酸酶特性比对研究 | 第48-73页 |
| 2.1 材料和方法 | 第48-55页 |
| 2.1.1 培养基及试剂配置 | 第48-50页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第50页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第50-51页 |
| 2.1.4 生物信息学分析工具 | 第51-52页 |
| 2.1.5 重组蛋白的诱导表达 | 第52页 |
| 2.1.6 SDS-PAGE 电泳及核酸酶活性酶谱检测 | 第52-53页 |
| 2.1.7 酶的底物特异性测试 | 第53页 |
| 2.1.8 分光光度法测定耐热核酸酶活性 | 第53-54页 |
| 2.1.9 不同反应时间与酶活性的关系 | 第54页 |
| 2.1.10 温度，pH 对酶活性影响 | 第54页 |
| 2.1.11 金属离子对酶活性影响 | 第54页 |
| 2.1.12 金属螯合剂，巯基试剂及其它试剂对酶活性影响 | 第54-55页 |
| 2.2 结果与分析 | 第55-69页 |
| 2.2.1 序列比对及分析 | 第55-57页 |
| 2.2.2 氨基酸序列进化分析 | 第57-59页 |
| 2.2.3 耐热核酸酶在大肠杆菌中的表达及原位酶谱实验 | 第59-60页 |
| 2.2.4 酶的底物特异性 | 第60-61页 |
| 2.2.5 不同反应时间与酶活性的关系 | 第61-62页 |
| 2.2.6 温度、pH 对酶活性的影响 | 第62-64页 |
| 2.2.7 金属离子对酶活性的影响 | 第64-66页 |
| 2.2.8 金属螯合剂，巯基试剂和去污剂对酶活性的影响 | 第66-67页 |
| 2.2.9 蛋白质结构比对分析 | 第67-69页 |
| 2.3 讨论 | 第69-72页 |
| 2.4 本章小结 | 第72-73页 |
| 第三章 金黄色葡萄球菌中耐热核酸酶基因的表达分析 | 第73-94页 |
| 3.1 材料与方法 | 第73-81页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第73-74页 |
| 3.1.2 培养基 | 第74页 |
| 3.1.3 主要试剂及配置 | 第74-75页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第75-76页 |
| 3.1.5 金黄色葡萄球菌培养条件和总 RNA 提取 | 第76页 |
| 3.1.6 金黄色葡萄球菌 cDNA 的合成 | 第76-77页 |
| 3.1.7 引物和探针的设计合成 | 第77-78页 |
| 3.1.8 Real-time PCR 标准曲线制作 | 第78-79页 |
| 3.1.9 耐热核酸酶基因的表达检测 | 第79页 |
| 3.1.10 耐热核酸酶基因的相对表达校准 | 第79-80页 |
| 3.1.11 耐热核酸酶活性测定方法 | 第80-81页 |
| 3.2 结果与分析 | 第81-90页 |
| 3.2.1 金黄色葡萄球菌 RNA 的提取及纯化 | 第81-82页 |
| 3.2.2 Taqman 荧光定量 PCR 标准曲线及引物扩增效率 | 第82-84页 |
| 3.2.3 不同生长阶段的 nuc1 和 nuc2 基因的表达差异 | 第84-86页 |
| 3.2.4 调控基因 sae 突变对耐热核酸基因表达影响 | 第86-88页 |
| 3.2.5 不同菌株中的耐热核酸基因的表达 | 第88-90页 |
| 3.3 讨论 | 第90-93页 |
| 3.4 本章小结 | 第93-94页 |
| 第四章 金黄色葡萄球菌突变株的构建筛选及特性分析 | 第94-125页 |
| 4.1 材料和方法 | 第94-109页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第94页 |
| 4.1.2 培养基及试剂的配制 | 第94-97页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第97页 |
| 4.1.4 引物设计与合成 | 第97-98页 |
| 4.1.5 金葡细菌基因组 DNA 的提取 | 第98-99页 |
| 4.1.6 PCR 扩增及产物纯化 | 第99-100页 |
| 4.1.7 同源重组质粒 pBT2Δnuc2 的构建 | 第100-102页 |
| 4.1.8 同源重组质粒电转化金黄色葡萄球菌感受态细胞 | 第102-104页 |
| 4.1.9 Nuc2 缺失突变株的筛选 | 第104-105页 |
| 4.1.10 Nuc2 缺失突变株的鉴定 | 第105-107页 |
| 4.1.11 Nuc1nuc2 双缺失突变株的筛选与鉴定 | 第107-108页 |
| 4.1.12 双突变互补菌株构建 | 第108页 |
| 4.1.13 从金黄色葡萄球菌阳性转化子中提取质粒的方法 | 第108-109页 |
| 4.1.14 菌株的耐热核酸酶活测定 | 第109页 |
| 4.2 结果和分析 | 第109-121页 |
| 4.2.1 同源重组质粒 pBT2Δnuc2 的构建及鉴定 | 第109-112页 |
| 4.2.2 菌株 RN4220 的 nuc2 缺失突变株筛选 | 第112-115页 |
| 4.2.3 金葡菌 nuc2 突变株的验证 | 第115-116页 |
| 4.2.4 nuc1 及 nuc2 基因突变对耐热核酸酶活性影响 | 第116-117页 |
| 4.2.5 nuc1nuc2 双缺失突变株的构建及验证 | 第117-119页 |
| 4.2.6 双突变株的互补载体 pBT2-NUC2C 的构建 | 第119-120页 |
| 4.2.7 双突变菌株的互补实验 | 第120-121页 |
| 4.3 讨论 | 第121-124页 |
| 4.4 本章小结 | 第124-125页 |
| 第五章 金黄色葡萄球菌 nuc2、nuc1 突变株基因表达谱分析 | 第125-161页 |
| 5.1 材料和方法 | 第126-133页 |
| 5.1.1 主要仪器 | 第126页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第126页 |
| 5.1.3 基因表达芯片的定制 | 第126-127页 |
| 5.1.4 菌株及培养 | 第127页 |
| 5.1.5 芯片 RNA 样本的处理 | 第127-129页 |
| 5.1.6 芯片杂交 | 第129-130页 |
| 5.1.7 表达芯片数据的获得及分析方法 | 第130-131页 |
| 5.1.8 荧光定量 PCR 验证(qRT-PCR) | 第131-132页 |
| 5.1.9 差异基因代谢途径分析 | 第132-133页 |
| 5.2 结果和分析 | 第133-156页 |
| 5.2.1 总 RNA 提取及纯化 | 第133页 |
| 5.2.2 基因芯片杂交结果 | 第133-135页 |
| 5.2.3 基因芯片数据主成分分析 | 第135-136页 |
| 5.2.4 表达谱芯片差异影响基因 | 第136-149页 |
| 5.2.5 差异影响基因的荧光定量 PCR 验证 | 第149-151页 |
| 5.2.6 差异影响基因的分析 | 第151-156页 |
| 5.3 讨论 | 第156-160页 |
| 5.4 本章小结 | 第160-161页 |
| 第六章 突变株表型特征分析 | 第161-179页 |
| 6.1 材料和方法 | 第162-170页 |
| 6.1.1 实验所用菌株 | 第162页 |
| 6.1.2 主要仪器及耗材 | 第162-163页 |
| 6.1.3 表型芯片（PM）试剂的配制 | 第163-165页 |
| 6.1.4 金黄色葡萄球菌表型芯片测定方法 | 第165-167页 |
| 6.1.5 抗生素敏感性测定 | 第167-169页 |
| 6.1.6 菌株生长曲线及耐酸生长实验 | 第169页 |
| 6.1.7 菌膜形成测定 | 第169-170页 |
| 6.2 结果与分析 | 第170-175页 |
| 6.2.1 突变株表型芯片差异分析 | 第170-171页 |
| 6.2.2 抗生素敏感性测定 | 第171-173页 |
| 6.2.3 菌株生长曲线及耐酸生长实验 | 第173-174页 |
| 6.2.4 突变株菌膜形成能力的影响 | 第174-175页 |
| 6.3 讨论 | 第175-178页 |
| 6.4 本章小结 | 第178-179页 |
| 第七章 结论与展望 | 第179-182页 |
| 7.1 主要结论 | 第179-180页 |
| 7.2 创新性 | 第180页 |
| 7.3 展望 | 第180-182页 |
| 参考文献 | 第182-194页 |
| 附录 | 第194-197页 |
| 致谢 | 第197-199页 |
| 攻读学位期间已发表和准备中的学术论文 | 第199-200页 |
