| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-28页 |
| 1.1 羊奶的成分及其营养价值概述 | 第16页 |
| 1.2 泌乳过程中脂肪酸代谢研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 乳腺细胞外源吸收脂肪酸 | 第17-18页 |
| 1.2.2 脂肪酸的活化与运输 | 第18页 |
| 1.2.3 脂肪酸的从头合成与去饱和化 | 第18-19页 |
| 1.2.4 甘油三酯的合成与乳脂滴的组装 | 第19-20页 |
| 1.2.5 SREBP 与乳腺脂肪酸代谢 | 第20-21页 |
| 1.3 PPAR 家族与脂肪酸代谢 | 第21-26页 |
| 1.3.1 PPAR 家族及其组织表达分布 | 第22页 |
| 1.3.2 PPAR 家族与其激动剂 | 第22-24页 |
| 1.3.3 PPARG 调控脂肪酸代谢 | 第24-25页 |
| 1.3.4 PPARG 与疾病 | 第25-26页 |
| 1.4 PPARG 在泌乳过程中的功能研究 | 第26-27页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 第二章 山羊乳腺组织转录组测序与生物信息学分析 | 第28-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-29页 |
| 2.1.1 主要试剂和仪器 | 第28页 |
| 2.1.2 样品采集与 RNA 提取 | 第28页 |
| 2.1.3 mRNA 的纯化与处理 | 第28-29页 |
| 2.1.4 文库构建 | 第29页 |
| 2.1.5 上机测序 | 第29页 |
| 2.1.6 数据分析与序列组装 | 第29页 |
| 2.1.7 转录本的功能注释 | 第29页 |
| 2.1.8 基因表达丰度分析 | 第29页 |
| 2.2 结果 | 第29-33页 |
| 2.2.1 转录组 de novo 拼接结果 | 第29-30页 |
| 2.2.2 Unigene 长度和 GC 含量分析 | 第30-31页 |
| 2.2.3 Unigene 功能注释 | 第31页 |
| 2.2.4 GO 分类 | 第31-32页 |
| 2.2.5 KOG 分类 | 第32-33页 |
| 2.2.6 脂肪酸代谢过程中的几个关键因子 | 第33页 |
| 2.3. 讨论 | 第33-36页 |
| 2.3.1 转录组测序结果的质量 | 第33-35页 |
| 2.3.2 山羊乳腺组织中脂肪酸代谢相关基因 | 第35-36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 PPARG 的克隆、生物信息学分析与组织表达 | 第37-46页 |
| 3.1 材料与方法 | 第37-39页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第38页 |
| 3.1.4 山羊不同组织以及不同泌乳时期乳腺组织的采集 | 第38页 |
| 3.1.5 总 RNA 的提取与 cDNA 的合成 | 第38页 |
| 3.1.6 PPARG 的克隆与鉴定 | 第38页 |
| 3.1.7 PPARG 的生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 3.1.8 荧光定量检测 PPARG | 第39页 |
| 3.1.9 数据分析 | 第39页 |
| 3.2 结果 | 第39-44页 |
| 3.2.1 PPARG1 和 PPARG2 的克隆 | 第39页 |
| 3.2.2 同源性分析 | 第39-40页 |
| 3.2.3 结构预测与分析 | 第40-41页 |
| 3.2.4 组织表达分析 | 第41-43页 |
| 3.2.5 PPARG 在泌乳不同时期的表达差异 | 第43-44页 |
| 3.3 讨论 | 第44-45页 |
| 3.3.1 奶山羊 PPARG 基因的克隆 | 第44页 |
| 3.3.2 奶山羊 PPARG 基因的结构分析 | 第44页 |
| 3.3.3 PPARG 组织表达谱 | 第44-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 山羊乳腺上皮细胞中 PPARG 的活性检测 | 第46-57页 |
| 4.1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第46-47页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第47页 |
| 4.1.3 PPRE 序列和定量引物的合成 | 第47页 |
| 4.1.4 载体构建 | 第47页 |
| 4.1.5 细胞培养与处理 | 第47-48页 |
| 4.1.6 RNA 的提取与荧光定量 PCR 检测 | 第48页 |
| 4.1.7 细胞转染与处理 | 第48页 |
| 4.1.8 荧光素酶检测 | 第48页 |
| 4.1.9 MTT 试验 | 第48-49页 |
| 4.1.10 细胞内脂肪酸的提取 | 第49页 |
| 4.1.11 脂肪酸的检测 | 第49页 |
| 4.1.12 数据分析 | 第49页 |
| 4.2 结果 | 第49-53页 |
| 4.2.1 pGL3-PPRE 载体的构建 | 第49页 |
| 4.2.2 PPRE 在山羊乳腺细胞中的活性分析 | 第49-50页 |
| 4.2.3 PPRE 在 MCF-7 细胞中的活性分析 | 第50页 |
| 4.2.4 罗格列酮影响乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢基因的表达 | 第50-52页 |
| 4.2.5 罗格列酮激活 PPARG 影响乳腺上皮细胞的增殖 | 第52-53页 |
| 4.2.6 罗格列酮激活 PPARG 对乳腺上皮细胞中脂肪酸组成的影响 | 第53页 |
| 4.3 讨论 | 第53-56页 |
| 4.3.1 PPARG 对 PPRE 荧光素酶活性的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.2 罗格列酮激活 PPARG 对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.3 罗格列酮激活 PPARG 对细胞内脂肪酸组成的影响 | 第55页 |
| 4.3.4 PPARG 与乳腺上皮细胞的增殖 | 第55-56页 |
| 4.4 小结 | 第56-57页 |
| 第五章 PPARG 基因的 RNA 干扰研究 | 第57-70页 |
| 5.1 材料与方法 | 第57-60页 |
| 5.1.1 主要仪器设备 | 第57页 |
| 5.1.2 主要试验材料 | 第57-58页 |
| 5.1.3 山羊 PPARG 基因的 shRNA 干扰序列的设计与合成 | 第58页 |
| 5.1.4 pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体构建 | 第58页 |
| 5.1.5 pDsRed1-C1-PPARG 表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 5.1.6 shRNA 有效序列的筛选 | 第59页 |
| 5.1.7 重组腺病毒载体的构建 | 第59页 |
| 5.1.8 腺病毒的包装、扩增与滴度测定 | 第59-60页 |
| 5.1.9 腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳 MOI 的测定 | 第60页 |
| 5.1.10 PPARG 基因的 RNA 干扰效率检测 | 第60页 |
| 5.1.11 western blotting 试验 | 第60页 |
| 5.1.12 荧光定量 PCR | 第60页 |
| 5.2 结果 | 第60-68页 |
| 5.2.1 pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建 | 第60-61页 |
| 5.2.2 pDsRed1-C1- PPARG 载体的构建 | 第61-62页 |
| 5.2.3 shRNA 有效干扰序列的筛选 | 第62-63页 |
| 5.2.4 重组腺病毒载体的构建 | 第63页 |
| 5.2.5 腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第63-64页 |
| 5.2.6 最佳感染复数 MOI（Multiplicity Of Infection）的探索 | 第64-65页 |
| 5.2.7 PPARG 基因干扰效率的检测 | 第65-66页 |
| 5.2.8 PPARG 基因干扰对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第66-68页 |
| 5.3 讨论 | 第68-69页 |
| 5.3.1 腺病毒的包装 | 第68页 |
| 5.3.2 有效 shRNA 的筛选 | 第68页 |
| 5.3.3 干扰 PPARG 对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第68-69页 |
| 5.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第六章 PPARG1 的过表达研究 | 第70-82页 |
| 6.1 试验材料与方法 | 第70-73页 |
| 6.1.1 主要试验材料 | 第70页 |
| 6.1.2 主要试验仪器 | 第70页 |
| 6.1.3 重组腺病毒载体构建 | 第70-71页 |
| 6.1.4 超表达病毒 Ad-PPARG1 包装、扩增 | 第71页 |
| 6.1.5 细胞培养与处理 | 第71页 |
| 6.1.6 总 RNA 的提取与荧光定量 | 第71-72页 |
| 6.1.7 Western blotting | 第72页 |
| 6.1.8 超表达效率检测 | 第72页 |
| 6.1.9 细胞内脂肪酸的提取 | 第72页 |
| 6.1.10 脂肪酸的检测 | 第72页 |
| 6.1.11 数据处理 | 第72页 |
| 6.1.12 超表达 PPARG1 对脂肪酸代谢影响网络图构建 | 第72-73页 |
| 6.2 试验结果 | 第73-78页 |
| 6.2.1 pAd-PPARG1 腺病毒载体的构建 | 第73页 |
| 6.2.2 pAd-PPARG1 腺病毒的包装与扩增 | 第73-74页 |
| 6.2.3 最佳感染复数 MOI（Multiplicity Of Infection）的探索 | 第74页 |
| 6.2.4 PPARG1 基因超表达效率的检测 | 第74-75页 |
| 6.2.5 过表达 PPARG1 影响脂肪酸代谢相关基因 | 第75-77页 |
| 6.2.6 过表达 PPARG1 对脂肪酸组成的影响 | 第77-78页 |
| 6.2.7 过表达 PPARG1 基因网络构建 | 第78页 |
| 6.3 讨论 | 第78-81页 |
| 6.3.1 PPARG1 对脂肪酸代谢的影响 | 第78-79页 |
| 6.3.2 脂肪酸代谢网络构建 | 第79-80页 |
| 6.3.3 PPARG1 对脂肪酸组成的影响 | 第80-81页 |
| 6.4 本章小结 | 第81-82页 |
| 第七章 PPARG2 的过表达研究 | 第82-97页 |
| 7.1 试验材料与方法 | 第82-85页 |
| 7.1.1 主要试验材料 | 第82页 |
| 7.1.2 主要试验仪器 | 第82页 |
| 7.1.3 重组腺病毒载体构建 | 第82-83页 |
| 7.1.4 超表达病毒 Ad-PPARG2 包装、扩增 | 第83页 |
| 7.1.5 细胞培养与处理 | 第83页 |
| 7.1.6 总 RNA 的提取与荧光定量 | 第83页 |
| 7.1.7 Western blotting | 第83-84页 |
| 7.1.8 超表达效率检测 | 第84页 |
| 7.1.9 细胞内脂肪酸的提取 | 第84页 |
| 7.1.10 脂肪酸的检测 | 第84页 |
| 7.1.11 数据处理 | 第84页 |
| 7.1.12 超表达 PPARG1 对脂肪酸代谢影响网络图构建 | 第84-85页 |
| 7.2 试验结果 | 第85-90页 |
| 7.2.1 pAd-PPARG2 腺病毒载体的构建 | 第85页 |
| 7.2.2 pAd-PPARG2 腺病毒的包装与扩增 | 第85-86页 |
| 7.2.3 最佳感染复数 MOI（Multiplicity Of Infection）的探索 | 第86页 |
| 7.2.4 PPARG2 基因超表达效率的检测 | 第86-87页 |
| 7.2.5 过表达 PPARG2 影响脂肪酸代谢相关基因 | 第87-89页 |
| 7.2.6 过表达 PPARG2 对脂肪酸组成的影响 | 第89页 |
| 7.2.7 过表达 PPARG2 基因网络构建 | 第89-90页 |
| 7.3 讨论 | 第90-96页 |
| 7.3.1 病毒载体的高效构建 | 第90页 |
| 7.3.2 基因表达后的翻译调控 | 第90-91页 |
| 7.3.3 PPARG 与脂肪酸代谢网络 | 第91-95页 |
| 7.3.4 PPARG 与脂肪酸的去饱和化 | 第95-96页 |
| 7.4 本章小结 | 第96-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 本研究的创新点 | 第98-99页 |
| 存在问题及展望 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-116页 |
| 附录 | 第116-122页 |
| 缩略词（Abbreviation） | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 作者简介 | 第124页 |
