铝毒胁迫下大豆内参基因的筛选及相关基因表达分析
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 大豆及其在广西发展现状 | 第12页 |
| 1.2 铝的形态 | 第12-13页 |
| 1.3 铝的作用部位 | 第13页 |
| 1.4 铝毒伤害机理 | 第13页 |
| 1.5 植物抗铝毒机制 | 第13-16页 |
| 1.5.1 外部排斥机制 | 第13-14页 |
| 1.5.1.1 细胞壁和细胞膜对铝的作用 | 第14页 |
| 1.5.1.2 有机酸的分泌 | 第14页 |
| 1.5.1.3 根际pH升高 | 第14页 |
| 1.5.2 内部忍受机制 | 第14-16页 |
| 1.5.2.1 铝与有机酸的络合 | 第15页 |
| 1.5.2.2 液泡的区室化 | 第15页 |
| 1.5.2.3 铝诱导的逆境蛋白 | 第15-16页 |
| 1.6 耐铝基因的研究进展 | 第16页 |
| 1.6.1 ALMT基因研究进展 | 第16页 |
| 1.6.2 MATE基因研究进展 | 第16页 |
| 1.7 植物谷胱甘肽代谢 | 第16-18页 |
| 1.8 胼胝质代谢相关酶基因 | 第18页 |
| 1.9 荧光定量PCR | 第18-19页 |
| 1.10 内参基因 | 第19-20页 |
| 1.10.1 内参基因筛选的必要性 | 第19页 |
| 1.10.2 内参基因稳定性分析方法 | 第19-20页 |
| 1.10.2.1 △Ct值分析法 | 第20页 |
| 1.10.2.2 GeNorm软件分析法 | 第20页 |
| 1.10.2.3 NormFinder软件分析法 | 第20页 |
| 1.10.2.4 BestKeeper程序分析法 | 第20页 |
| 1.11 实验的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.1 技术路线 | 第22页 |
| 2.2 大豆的培养 | 第22-23页 |
| 2.3 RNA提取和保存 | 第23页 |
| 2.4 DNA的去除 | 第23页 |
| 2.5 RNA质量检测 | 第23-24页 |
| 2.6 cDNA的合成 | 第24页 |
| 2.7 内参基因引物设计和实时定量 | 第24-28页 |
| 2.7.1 内参基因引物设计 | 第24-27页 |
| 2.7.2 内参基因引物梯度PCR | 第27页 |
| 2.7.3 引物的扩增效率和实时荧光定量 | 第27-28页 |
| 2.7.3.1 模板的稀释和取样 | 第27页 |
| 2.7.3.2 荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 2.7.3.3 引物的扩增效率计算 | 第28页 |
| 2.7.4 内参基因稳定性数据分析 | 第28页 |
| 2.8 目的基因实验和数据处理 | 第28-32页 |
| 2.8.1 目的基因引物设计 | 第28-30页 |
| 2.8.2 引物梯度PCR | 第30页 |
| 2.8.3 目的基因克隆与转化 | 第30-31页 |
| 2.8.3.1 目的基因的克隆 | 第30页 |
| 2.8.3.2 目的基因胶回收 | 第30页 |
| 2.8.3.3 目的片段与载体的连接 | 第30-31页 |
| 2.8.3.4 细胞转化、测序 | 第31页 |
| 2.8.4 目的基因荧光定量PCR | 第31页 |
| 2.8.5 数据处理和分析 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-60页 |
| 3.1 大豆根尖总RNA的提取 | 第32页 |
| 3.2 内参基因结果 | 第32-44页 |
| 3.2.1 内参基因引物梯度PCR | 第32-33页 |
| 3.2.2 引物的扩增效率 | 第33-34页 |
| 3.2.3 扩增曲线和熔解曲线 | 第34页 |
| 3.2.4 Ct值的可靠性分析 | 第34-35页 |
| 3.2.5 基因稳定性分析 | 第35-44页 |
| 3.2.5.1 △Ct值分析法 | 第35页 |
| 3.2.5.2 GerNorm软件分析 | 第35-38页 |
| 3.2.5.3 NormFinder软件分析 | 第38-42页 |
| 3.2.5.4 BestKeeper软件分析 | 第42-44页 |
| 3.3 目的基因 | 第44-60页 |
| 3.3.1 目的基因引物梯度PCR扩增 | 第44页 |
| 3.3.2 菌液PCR图 | 第44-45页 |
| 3.3.3 测序结果比对 | 第45-46页 |
| 3.3.4 目的基因熔解曲线 | 第46-48页 |
| 3.3.5 目的基因荧光定量结果分析 | 第48-60页 |
| 3.3.5.1 ALMT和MATE基因结果分析 | 第48-49页 |
| 3.3.5.2 谷胱丙肽代谢相关基因的表达分析 | 第49-53页 |
| 3.3.5.3 胼胝质代谢相关基因的表达分析 | 第53-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-67页 |
| 4.1 荧光定量PCR技术 | 第60页 |
| 4.2 评价内参稳定的方法 | 第60-61页 |
| 4.3 内参基因分析 | 第61-63页 |
| 4.4 目的基因荧光定量结果讨论 | 第63-67页 |
| 4.4.1 ALMT和MATE基因 | 第63-64页 |
| 4.4.2 谷胱丙肽代谢相关酶基因 | 第64-65页 |
| 4.4.3 胼胝质代谢相关基因 | 第65-67页 |
| 第五章 结论 | 第67-68页 |
| 第六章 创新点、展望 | 第68-69页 |
| 6.1 论文创新点 | 第68页 |
| 6.2 展望 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录 | 第77-90页 |
