摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
第一章 绪言 | 第11-26页 |
1.1 木聚糖酶的研究进展 | 第11-25页 |
1.1.1 木聚糖酶的概述 | 第11-12页 |
1.1.2 木聚糖酶的分类及结构特点 | 第12-14页 |
1.1.3 产木聚糖酶菌株的选育及其酶学性质 | 第14-16页 |
1.1.4 木聚糖酶基因的克隆 | 第16-18页 |
1.1.5 木聚糖酶基因的表达 | 第18-20页 |
1.1.6 木聚糖酶的应用 | 第20-23页 |
1.1.7 木聚糖酶的分子生物学研究进展 | 第23-25页 |
1.2 本文研究的主要内容及其目的意义 | 第25-26页 |
第二章 材料与方法 | 第26-45页 |
2.1 材料与方法 | 第26-28页 |
2.1.1 菌株 | 第26页 |
2.1.2 载体 | 第26-27页 |
2.1.3 主要试剂盒 | 第27页 |
2.1.4 培养基和试剂 | 第27-28页 |
2.1.5 主要仪器 | 第28页 |
2.2 方法 | 第28-45页 |
2.2.1 菌株的筛选 | 第28-30页 |
2.2.2 中性内切木聚糖酶的分离纯化 | 第30-31页 |
2.2.2.1 中性内切木聚糖酶的阳离子交换层析 | 第30页 |
2.2.2.2 中性内切木聚糖酶的酶学性质研究 | 第30-31页 |
2.2.3 Streptomyces sp.H33基因的克隆 | 第31-38页 |
2.2.3.1 Streptomyces sp.H33基因组的提取 | 第31-32页 |
2.2.3.2 扩增Streptomyces sp.H33的 16S rDNA | 第32页 |
2.2.3.3 Touch Down PCR克隆内切木聚糖酶基因的中间保守序列 | 第32-33页 |
2.2.3.4 Touch down PCR产物回收 | 第33-34页 |
2.2.3.5 感受态细胞制备 | 第34页 |
2.2.3.6 Touch down PCR产物的连接、转化和测序 | 第34-35页 |
2.2.3.7 TAIL-PCR克隆内切木聚糖酶基因保守序列的上下游 | 第35-37页 |
2.2.3.8 TAIL-PCR产物回收 | 第37页 |
2.2.3.9 TAIL-PCR产物的连接、转化和测序 | 第37-38页 |
2.2.3.10 获得中性木聚糖酶基因全长序列 | 第38页 |
2.2.3.11 内切木聚糖酶基因全长的获得 | 第38页 |
2.2.4 中性内切木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第38-42页 |
2.2.4.1 重组质粒pET-28a-H33的构建 | 第38-39页 |
2.2.4.2 E.coli TOP10F’和E.coli BL21 Star(DE3)感受态细胞的制备 | 第39页 |
2.2.4.3 转化E.coli TOP10F’感受态细胞 | 第39-40页 |
2.2.4.4 转化子E.coli TOP10F’-H33的培养及检测 | 第40页 |
2.2.4.5 重组质粒的小量制备 | 第40-41页 |
2.2.4.6 E.coli BL21 Star (DE3)的转化 | 第41页 |
2.2.4.7 转化子E.coli BL21 Star (DE3)-H33的培养及检测 | 第41页 |
2.2.4.8 重组大肠杆菌BL21 Star (DE3)-H33的诱导表达 | 第41-42页 |
2.2.5 重组内切木聚糖酶XYN-H33蛋白分离纯化 | 第42页 |
2.2.6 蛋白质电泳分析 | 第42-43页 |
2.2.7 重组内切木聚糖酶XYN-H33的酶学特性研究 | 第43-45页 |
2.2.7.1 XYN-H33的最适温度与温度稳定性 | 第43-44页 |
2.2.7.2 XYN-H33的最适pH与pH稳定性 | 第44页 |
2.2.7.3 不同金属离子对XYN-H33酶活力的影响 | 第44-45页 |
第三章 结果 | 第45-66页 |
3.1 产中性内切木聚糖酶菌株的筛选结果 | 第45-46页 |
3.2 Streptomyces sp.H33中性内切木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第46-51页 |
3.2.1 中性内切木聚糖酶的分离纯化 | 第46-48页 |
3.2.1.1 粗酶液的制备 | 第46-47页 |
3.2.1.2 阳离子交换层析 | 第47-48页 |
3.2.2 中性内切木聚糖酶的酶学性质研究 | 第48-51页 |
3.2.2.1 酶的最适反应温度 | 第48-49页 |
3.2.2.2 酶的温度稳定性 | 第49页 |
3.2.2.3 酶的最适反应pH | 第49-50页 |
3.2.2.4 酶的pH稳定性 | 第50页 |
3.2.2.5 金属离子及表面活性剂对酶活的影响 | 第50-51页 |
3.3 Streptomyces sp.H33中性内切木聚糖酶基因的克隆 | 第51-60页 |
3.3.1 Streptomyces sp.H33基因组提取结果 | 第51-52页 |
3.3.2 克隆Streptomyces sp.H33中性内切木聚糖酶基因的中间保守序列 | 第52-53页 |
3.3.2.1 Touch down PCR克隆中间保守序列产物电泳图 | 第52页 |
3.3.2.2 中性内切木聚糖酶基因中间保守序列的测序结果 | 第52-53页 |
3.3.3 TAIL-PCR克隆保守序列上游基因结果 | 第53-55页 |
3.3.3.1 TAIL-PCR克隆保守序列上游基因 | 第53-54页 |
3.3.3.2 保守序列上游基因的测序结果 | 第54-55页 |
3.3.4 TAIL-PCR克隆保守序列下游基因结果 | 第55-57页 |
3.3.4.1 TAIL-PCR克隆保守序列下游基因 | 第55页 |
3.3.4.2 保守序列下游基因测序结果 | 第55-57页 |
3.3.5 中性内切木聚糖酶全长基因及其编码的氨基酸序列 | 第57-60页 |
3.3.5.1 中性内切木聚糖酶完整的酶基因序列 | 第57-58页 |
3.3.5.2 中性内切木聚糖酶基因编码的氨基酸序列 | 第58页 |
3.3.5.3 中性内切木聚糖酶氨基酸序列的比对结果 | 第58-60页 |
3.4 中性内切木聚糖酶基因在重组大肠杆菌中的表达 | 第60-62页 |
3.4.1 中性内切木聚糖酶目的基因的获取 | 第60页 |
3.4.2 pET-28a-H33重组质粒的构建 | 第60-61页 |
3.4.3 E.coli BL21 Star (DE3)的转化 | 第61-62页 |
3.4.4 E.coli BL21 Star (DE3)-H33的诱导表达 | 第62页 |
3.5 重组内切木聚糖酶XYN-H33蛋白分离纯化 | 第62页 |
3.6 重组内切木聚糖酶XYN-H33的酶学性质研究 | 第62-66页 |
3.6.1 酶的最适温度 | 第62-63页 |
3.6.2 酶的温度稳定性 | 第63页 |
3.6.3 酶的最适pH | 第63-64页 |
3.6.4 酶的pH稳定性 | 第64-65页 |
3.6.5 金属离子等对酶活的影响 | 第65-66页 |
第四章 讨论 | 第66-70页 |
4.1 Streptomyces sp.H33菌株的筛选 | 第66页 |
4.2 中性内切木聚糖酶的分离纯化 | 第66-67页 |
4.3 中性内切木聚糖酶基因的克隆 | 第67-68页 |
4.4 中性内切木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第68-70页 |
第五章 结论 | 第70-71页 |
参考文献 | 第71-79页 |
附录 | 第79-81页 |
致谢 | 第81-82页 |
攻读硕士学位期间的研究成果 | 第82页 |