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Streptomyces sp.H33中性内切木聚糖酶分离纯化及其酶基因的克隆表达

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
第一章 绪言第11-26页
    1.1 木聚糖酶的研究进展第11-25页
        1.1.1 木聚糖酶的概述第11-12页
        1.1.2 木聚糖酶的分类及结构特点第12-14页
        1.1.3 产木聚糖酶菌株的选育及其酶学性质第14-16页
        1.1.4 木聚糖酶基因的克隆第16-18页
        1.1.5 木聚糖酶基因的表达第18-20页
        1.1.6 木聚糖酶的应用第20-23页
        1.1.7 木聚糖酶的分子生物学研究进展第23-25页
    1.2 本文研究的主要内容及其目的意义第25-26页
第二章 材料与方法第26-45页
    2.1 材料与方法第26-28页
        2.1.1 菌株第26页
        2.1.2 载体第26-27页
        2.1.3 主要试剂盒第27页
        2.1.4 培养基和试剂第27-28页
        2.1.5 主要仪器第28页
    2.2 方法第28-45页
        2.2.1 菌株的筛选第28-30页
        2.2.2 中性内切木聚糖酶的分离纯化第30-31页
            2.2.2.1 中性内切木聚糖酶的阳离子交换层析第30页
            2.2.2.2 中性内切木聚糖酶的酶学性质研究第30-31页
        2.2.3 Streptomyces sp.H33基因的克隆第31-38页
            2.2.3.1 Streptomyces sp.H33基因组的提取第31-32页
            2.2.3.2 扩增Streptomyces sp.H33的 16S rDNA第32页
            2.2.3.3 Touch Down PCR克隆内切木聚糖酶基因的中间保守序列第32-33页
            2.2.3.4 Touch down PCR产物回收第33-34页
            2.2.3.5 感受态细胞制备第34页
            2.2.3.6 Touch down PCR产物的连接、转化和测序第34-35页
            2.2.3.7 TAIL-PCR克隆内切木聚糖酶基因保守序列的上下游第35-37页
            2.2.3.8 TAIL-PCR产物回收第37页
            2.2.3.9 TAIL-PCR产物的连接、转化和测序第37-38页
            2.2.3.10 获得中性木聚糖酶基因全长序列第38页
            2.2.3.11 内切木聚糖酶基因全长的获得第38页
        2.2.4 中性内切木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达第38-42页
            2.2.4.1 重组质粒pET-28a-H33的构建第38-39页
            2.2.4.2 E.coli TOP10F’和E.coli BL21 Star(DE3)感受态细胞的制备第39页
            2.2.4.3 转化E.coli TOP10F’感受态细胞第39-40页
            2.2.4.4 转化子E.coli TOP10F’-H33的培养及检测第40页
            2.2.4.5 重组质粒的小量制备第40-41页
            2.2.4.6 E.coli BL21 Star (DE3)的转化第41页
            2.2.4.7 转化子E.coli BL21 Star (DE3)-H33的培养及检测第41页
            2.2.4.8 重组大肠杆菌BL21 Star (DE3)-H33的诱导表达第41-42页
        2.2.5 重组内切木聚糖酶XYN-H33蛋白分离纯化第42页
        2.2.6 蛋白质电泳分析第42-43页
        2.2.7 重组内切木聚糖酶XYN-H33的酶学特性研究第43-45页
            2.2.7.1 XYN-H33的最适温度与温度稳定性第43-44页
            2.2.7.2 XYN-H33的最适pH与pH稳定性第44页
            2.2.7.3 不同金属离子对XYN-H33酶活力的影响第44-45页
第三章 结果第45-66页
    3.1 产中性内切木聚糖酶菌株的筛选结果第45-46页
    3.2 Streptomyces sp.H33中性内切木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究第46-51页
        3.2.1 中性内切木聚糖酶的分离纯化第46-48页
            3.2.1.1 粗酶液的制备第46-47页
            3.2.1.2 阳离子交换层析第47-48页
        3.2.2 中性内切木聚糖酶的酶学性质研究第48-51页
            3.2.2.1 酶的最适反应温度第48-49页
            3.2.2.2 酶的温度稳定性第49页
            3.2.2.3 酶的最适反应pH第49-50页
            3.2.2.4 酶的pH稳定性第50页
            3.2.2.5 金属离子及表面活性剂对酶活的影响第50-51页
    3.3 Streptomyces sp.H33中性内切木聚糖酶基因的克隆第51-60页
        3.3.1 Streptomyces sp.H33基因组提取结果第51-52页
        3.3.2 克隆Streptomyces sp.H33中性内切木聚糖酶基因的中间保守序列第52-53页
            3.3.2.1 Touch down PCR克隆中间保守序列产物电泳图第52页
            3.3.2.2 中性内切木聚糖酶基因中间保守序列的测序结果第52-53页
        3.3.3 TAIL-PCR克隆保守序列上游基因结果第53-55页
            3.3.3.1 TAIL-PCR克隆保守序列上游基因第53-54页
            3.3.3.2 保守序列上游基因的测序结果第54-55页
        3.3.4 TAIL-PCR克隆保守序列下游基因结果第55-57页
            3.3.4.1 TAIL-PCR克隆保守序列下游基因第55页
            3.3.4.2 保守序列下游基因测序结果第55-57页
        3.3.5 中性内切木聚糖酶全长基因及其编码的氨基酸序列第57-60页
            3.3.5.1 中性内切木聚糖酶完整的酶基因序列第57-58页
            3.3.5.2 中性内切木聚糖酶基因编码的氨基酸序列第58页
            3.3.5.3 中性内切木聚糖酶氨基酸序列的比对结果第58-60页
    3.4 中性内切木聚糖酶基因在重组大肠杆菌中的表达第60-62页
        3.4.1 中性内切木聚糖酶目的基因的获取第60页
        3.4.2 pET-28a-H33重组质粒的构建第60-61页
        3.4.3 E.coli BL21 Star (DE3)的转化第61-62页
        3.4.4 E.coli BL21 Star (DE3)-H33的诱导表达第62页
    3.5 重组内切木聚糖酶XYN-H33蛋白分离纯化第62页
    3.6 重组内切木聚糖酶XYN-H33的酶学性质研究第62-66页
        3.6.1 酶的最适温度第62-63页
        3.6.2 酶的温度稳定性第63页
        3.6.3 酶的最适pH第63-64页
        3.6.4 酶的pH稳定性第64-65页
        3.6.5 金属离子等对酶活的影响第65-66页
第四章 讨论第66-70页
    4.1 Streptomyces sp.H33菌株的筛选第66页
    4.2 中性内切木聚糖酶的分离纯化第66-67页
    4.3 中性内切木聚糖酶基因的克隆第67-68页
    4.4 中性内切木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达第68-70页
第五章 结论第70-71页
参考文献第71-79页
附录第79-81页
致谢第81-82页
攻读硕士学位期间的研究成果第82页

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