| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 马铃薯Y病毒 | 第9-10页 |
| 1.1.1 马铃薯Y病毒概述 | 第9页 |
| 1.1.2 马铃薯Y病毒的基因组学研究 | 第9-10页 |
| 1.2 真核翻译起始因子eIF4E的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.1 eIF4E | 第10-11页 |
| 1.2.2 eIF4E与PVY抗病相关性 | 第11-12页 |
| 1.3 TALEN基因定点改造技术 | 第12-14页 |
| 1.3.1 TALEN的结构与原理 | 第12-13页 |
| 1.3.2 TALEN技术的应用与展望 | 第13-14页 |
| 1.4 目的与意义 | 第14页 |
| 1.5 技术路线 | 第14页 |
| 1.6 预期目标及试验方案 | 第14-16页 |
| 第2章 材料与方法 | 第16-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第16页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第16页 |
| 2.1.3 试剂 | 第16页 |
| 2.1.4 引物 | 第16-17页 |
| 2.1.5 仪器与设备 | 第17-18页 |
| 2.1.6 培养基 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-32页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第18-24页 |
| 2.2.2 工程菌的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.3 根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第25-26页 |
| 2.2.4 烟草转化株的PCR鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.5 接种病毒后烟株eIF4E-6基因表达量与PVY病毒检测 | 第28-30页 |
| 2.2.6 接种病毒后烟株相关酶活性测定 | 第30-31页 |
| 2.2.7 突变材料的抗性鉴定 | 第31-32页 |
| 第3章 结果与分析 | 第32-49页 |
| 3.1 载体构建 | 第32-35页 |
| 3.1.1 TALEN靶位点序列的设计 | 第32页 |
| 3.1.2 TALEN左右臂载体的构建 | 第32-34页 |
| 3.1.3 TALENs活性检测 | 第34页 |
| 3.1.4 敲除载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.2 工程菌的制备与鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3 根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第36-39页 |
| 3.3.1 烟草K326无菌苗 | 第36页 |
| 3.3.2 烟草的遗传转化 | 第36-37页 |
| 3.3.3 烟草的遗传转化 | 第37-39页 |
| 3.4 烟草转化株的PCR鉴定 | 第39-42页 |
| 3.4.1 转化株的阳性转基因检测 | 第39页 |
| 3.4.2 阳性转化株的eIF4E-6 基因突变检测 | 第39-40页 |
| 3.4.3 序列比对分析 | 第40-42页 |
| 3.5 接种病毒后烟株eIF4E-6 基因表达量 | 第42页 |
| 3.6 烟株PVY病毒检测 | 第42-43页 |
| 3.7 接种病毒后烟株相关酶活性的测定 | 第43-47页 |
| 3.7.1 标准曲线的制作 | 第43-44页 |
| 3.7.2 酶的活性测定 | 第44-47页 |
| 3.8 突变材料的PVY抗性鉴定 | 第47-49页 |
| 第4章 讨论 | 第49-51页 |
| 4.1 烟草eIF4E-6 基因的定向敲除 | 第49页 |
| 4.2 TALENs技术的剪切活性 | 第49-50页 |
| 4.3 基于基因编辑技术的品种定向改良 | 第50-51页 |
| 第5章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 在校期间发表的论文 | 第83页 |