| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征 | 第13-14页 |
| 1.2 PRRSV分类地位及生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.2.1 分类地位及形态特征 | 第14页 |
| 1.2.2 生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.3 PRRSV基因组及编码蛋白 | 第15-19页 |
| 1.3.1 基因组结构 | 第15页 |
| 1.3.2 非结构蛋白 | 第15-16页 |
| 1.3.3 结构蛋白 | 第16-18页 |
| 1.3.4 遗传变异 | 第18-19页 |
| 1.4 PRRSV免疫学反应 | 第19-22页 |
| 1.4.1 先天免疫 | 第19-20页 |
| 1.4.2 体液免疫 | 第20页 |
| 1.4.3 细胞免疫 | 第20-22页 |
| 第2章 本论文的研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第3章 PRRS病毒核衣壳蛋白真核表达载体的构建 | 第23-39页 |
| 3.1 材料与方法 | 第24-34页 |
| 3.1.1 毒株、菌株与细胞 | 第24-25页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第25页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第25-26页 |
| 3.1.4 细胞培养与病毒扩增 | 第26页 |
| 3.1.5 病毒总RNA提取及目的基因扩增 | 第26-28页 |
| 3.1.6 pCI-neo-N真核表达载体的构建 | 第28-31页 |
| 3.1.7 pCI-neo-N真核载体的表达活性鉴定 | 第31-34页 |
| 3.2 结果与分析 | 第34-38页 |
| 3.2.1 目的基因的RT-PCR扩增 | 第34页 |
| 3.2.2 pCI-neo-N重组载体鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2.3 pCI-neo-N载体表达活性鉴定 | 第36-38页 |
| 3.3 结论 | 第38-39页 |
| 第4章 猪IL-10 SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立 | 第39-48页 |
| 4.1 材料和方法 | 第40-43页 |
| 4.1.1 菌种及细胞 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第40-41页 |
| 4.1.3 荧光定量引物的设计与合成 | 第41页 |
| 4.1.4 RNA提取及cDNA的合成 | 第41页 |
| 4.1.5 质粒标准品的制备 | 第41-42页 |
| 4.1.6 Real-time PCR反应条件的优化 | 第42页 |
| 4.1.7 Real-time PCR标准曲线的建立 | 第42页 |
| 4.1.8 Real-time PCR敏感性试验 | 第42页 |
| 4.1.9 Real-time PCR特异性试验 | 第42页 |
| 4.1.10 Real-time PCR重复性试验 | 第42-43页 |
| 4.2 结果与分析 | 第43-45页 |
| 4.2.1 质粒标准品的制备 | 第43页 |
| 4.2.2 Real-time PCR反应条件的优化 | 第43页 |
| 4.2.3 Real-time PCR标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| 4.2.4 Real-time PCR敏感性试验 | 第44页 |
| 4.2.5 Real-time PCR特异性分析 | 第44-45页 |
| 4.2.6 Rea-time PCR重复性试验 | 第45页 |
| 4.3 讨论 | 第45-46页 |
| 4.4 结论 | 第46-48页 |
| 第5章 PRRSV核衣壳蛋白诱导猪肺泡巨噬细胞白介素-10表达的分子机制 | 第48-63页 |
| 5.1 材料和方法 | 第50-51页 |
| 5.1.1 毒株、菌株及细胞 | 第50页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第50页 |
| 5.1.3 统计学分析 | 第50-51页 |
| 5.1.4 其它操作方法 | 第51页 |
| 5.2 结果与分析 | 第51-59页 |
| 5.2.1 PRRSV核衣壳蛋白显著上调PAM细胞的IL-10表达 | 第51-52页 |
| 5.2.2 核衣壳蛋白诱导IL-10表达的时间模式、剂量模式分析 | 第52-53页 |
| 5.2.3 核衣壳蛋白缺失突变体真核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 5.2.4 核衣壳蛋白缺失突变体对PAM IL-10的诱导能力分析 | 第54-55页 |
| 5.2.5 NF-κB信号通路参与N蛋白对IL-10的上调作用 | 第55-56页 |
| 5.2.6 PI3K信号通路不参与N蛋白对IL-10的上调作用 | 第56-57页 |
| 5.2.7 p38 MAPK信号通路参与N蛋白对IL-10的上调 | 第57-58页 |
| 5.2.8 NF-κB及p38 MAPK介导N蛋白突变体对IL-10的上调 | 第58-59页 |
| 5.3 讨论 | 第59-63页 |
| 参考文献 | 第63-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 硕士期间发表论文及申请专利 | 第80-81页 |
| 学位论义评阅及答辩情况表 | 第81页 |
