| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 降解PAHs的微生物 | 第10-14页 |
| 1.1.1 微生物降解PAHs的机制 | 第11-12页 |
| 1.1.2 微生物降解PAHs的关键酶 | 第12-14页 |
| 1.2 芳香族化合物在尿黑酸代谢途径的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3 基因工程菌在芳香族化合物降解中的应用 | 第16-18页 |
| 1.4 本课题的研究内容及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 芘降解菌的驯化、筛选及鉴定 | 第20-33页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 油土混合样品的收集及保存 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.5 实验中使用的菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 菌种的驯化及筛选 | 第22页 |
| 2.2.2 菌落的形态观察 | 第22页 |
| 2.2.3 16S rDNA分子生物学鉴定 | 第22-26页 |
| 2.2.4 芘降解菌的降解实验 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-31页 |
| 2.3.1 菌落的形态观察结果 | 第27-28页 |
| 2.3.2 16S rDNA的扩增结果 | 第28-29页 |
| 2.3.3 基于 16S rDNA的系统发育分析 | 第29-30页 |
| 2.3.4 HPLC法测定芘降解情况 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-33页 |
| 第三章 构建PT7操控双加氧酶基因表达的重组质粒 | 第33-45页 |
| 3.1 材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 培养基 | 第33页 |
| 3.1.2 试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 试剂盒 | 第33页 |
| 3.1.4 工具酶 | 第33页 |
| 3.1.5 菌株和质粒 | 第33-34页 |
| 3.2 方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 双加氧酶基因dio6的克隆 | 第34-35页 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第37-44页 |
| 3.3.1 dio6的克隆结果 | 第37-38页 |
| 3.3.2 PT7重组质粒的构建结果 | 第38-40页 |
| 3.3.3 重组质粒的电泳验证结果 | 第40-41页 |
| 3.3.4 双加氧酶dio6的测序结果及分析 | 第41-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 Dio6的表达、纯化与酶促实验 | 第45-62页 |
| 4.1 材料 | 第45-47页 |
| 4.1.1 菌株 | 第45页 |
| 4.1.2 培养基 | 第45页 |
| 4.1.3 试剂 | 第45-47页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第47页 |
| 4.1.5 试剂盒 | 第47页 |
| 4.2 方法 | 第47-54页 |
| 4.2.1 超级BL21感受态的制备 | 第47-48页 |
| 4.2.2 BL21（DE3）的相关转化 | 第48页 |
| 4.2.3 双加氧酶dio6的蛋白表达与纯化 | 第48-51页 |
| 4.2.4 底物降解实验 | 第51-52页 |
| 4.2.5 TLC、HPLC对dio6反应条件的初步探索 | 第52-54页 |
| 4.2.6 LC-MS推测酶促产物 | 第54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-61页 |
| 4.3.1 不同温度dio6蛋白表达结果 | 第54-55页 |
| 4.3.2 纯化dio6的结果 | 第55-57页 |
| 4.3.3 HPLC检测dio6对Tyr的作用 | 第57-58页 |
| 4.3.4 双加氧酶最适反应参数的优化 | 第58-60页 |
| 4.3.5 LC-MS检测酶促反应结果 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 Dio6生物信息学分析 | 第62-69页 |
| 5.1 材料 | 第62页 |
| 5.2 生物软件及工具 | 第62页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第62-68页 |
| 5.3.1 探寻开放阅读框 | 第62-63页 |
| 5.3.2 aa序列的基本物理化学参数 | 第63-64页 |
| 5.3.3 疏水性分析 | 第64-65页 |
| 5.3.4 跨膜预测结果 | 第65-66页 |
| 5.3.5 信号肽预测 | 第66页 |
| 5.3.6 蛋白二级结构预测 | 第66-67页 |
| 5.3.7 三级结构预测 | 第67-68页 |
| 5.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第六章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 6.1 研究结论 | 第69页 |
| 6.2 研究创新点 | 第69页 |
| 6.3 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 硕士研究生期间发表论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |