| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-41页 |
| 第一章 转基因动物生产研究进展 | 第13-27页 |
| 1.1 转基因动物生产的发展历程 | 第13-14页 |
| 1.2 基因编辑技术研究进展 | 第14-22页 |
| 1.2.1 基因编辑技术机理 | 第14-16页 |
| 1.2.2 锌指核酸酶 | 第16-18页 |
| 1.2.3 TALE核酸酶 | 第18-20页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9 | 第20-22页 |
| 1.3 转基因动物生产的应用 | 第22-27页 |
| 1.3.1 提高动物生产性能 | 第22-24页 |
| 1.3.2 在生物医学上的应用 | 第24-25页 |
| 1.3.3 提高动物抗病能力 | 第25-27页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9系统及转基因动物生产 | 第27-41页 |
| 2.1 CRISPR系统概述 | 第27-29页 |
| 2.1.1 CRISPR系统的发现历程 | 第27-28页 |
| 2.1.2 CRISPR系统的分类 | 第28-29页 |
| 2.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第29-37页 |
| 2.2.1 CRISPR/Cas9系统的结构 | 第29-31页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9对靶位点的识别与切割 | 第31-32页 |
| 2.2.3 CRISPR/Cas9的打靶精准性 | 第32-37页 |
| 2.3 CRISPR/Cas9在动物转基因上的应用 | 第37-41页 |
| 2.3.1 NHEJ介导的基因敲除 | 第37-39页 |
| 2.3.2 HDR介导的基因定点整合 | 第39页 |
| 2.3.3 转录调控基因表达 | 第39-41页 |
| 实验研究 | 第41-119页 |
| 第三章 CRISPR/Cas9打靶位点的筛选及活性检测 | 第41-61页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第42页 |
| 3.1.1 材料 | 第42页 |
| 3.1.2 试剂 | 第42页 |
| 3.2 方法 | 第42-49页 |
| 3.2.1 打靶基因座的选择 | 第42-43页 |
| 3.2.2 打靶位点的软件预测与筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.3 CRISPR/Cas9真核表达载体构建 | 第44-45页 |
| 3.2.4 CRISPR/Cas9打靶位点的切割效率检测 | 第45-47页 |
| 3.2.5 CRISPR/Cas9打靶策略选择与活性检测 | 第47-49页 |
| 3.3 结果 | 第49-58页 |
| 3.3.1 打靶基因座的选择 | 第49-50页 |
| 3.3.2 打靶位点的软件预测与筛选 | 第50-52页 |
| 3.3.3 CRISPR/Cas9真核表达载体构建 | 第52-53页 |
| 3.3.4 CRISPR/Cas9打靶位点的切割效率检测 | 第53-56页 |
| 3.3.5 不同打靶策略下Cas9系统活性检测 | 第56-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-61页 |
| 第四章 牛胎儿成纤维细胞中sgRNA-dCas9结合位点的鉴定 | 第61-81页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第61-62页 |
| 4.1.1 材料 | 第61页 |
| 4.1.2 试剂 | 第61-62页 |
| 4.2 方法 | 第62-69页 |
| 4.2.1 dCas9真核表达载体构建 | 第62页 |
| 4.2.2 dCas9-sgRNA在BFFs基因组的结合位点鉴定 | 第62-69页 |
| 4.3 结果 | 第69-79页 |
| 4.3.1 dCas9真核表达载体构建 | 第69页 |
| 4.3.2 dCas9-sgRNA在BFFs基因组的结合位点鉴定 | 第69-74页 |
| 4.3.3 主要结合位点的特点分析 | 第74-76页 |
| 4.3.4 主要结合位点的实际脱靶效应验证 | 第76-79页 |
| 4.4 讨论 | 第79-80页 |
| 4.5 小结 | 第80-81页 |
| 第五章 NRAMP1精准插入的重组细胞筛选及转基因牛生产 | 第81-103页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第81-82页 |
| 5.1.1 材料 | 第81页 |
| 5.1.2 试剂 | 第81-82页 |
| 5.2 方法 | 第82-89页 |
| 5.2.1 牛NRAMP1基因功能验证 | 第82-84页 |
| 5.2.2 同源重组供体载体构建 | 第84-86页 |
| 5.2.3 细胞筛选及鉴定 | 第86-88页 |
| 5.2.4 体细胞核移植生产转基因牛 | 第88-89页 |
| 5.3 结果 | 第89-100页 |
| 5.3.1 牛NRAMP1基因的功能验证 | 第89-91页 |
| 5.3.2 同源重组供体载体构建 | 第91-94页 |
| 5.3.3 阳性克隆鉴定 | 第94-99页 |
| 5.3.4 体细胞核移植生产转基因牛 | 第99-100页 |
| 5.4 讨论 | 第100-101页 |
| 5.5 小结 | 第101-103页 |
| 第六章 转NRAMP1克隆牛的功能验证 | 第103-119页 |
| 6.1 材料和试剂 | 第103-104页 |
| 6.1.1 材料 | 第103-104页 |
| 6.1.2 试剂 | 第104页 |
| 6.2 方法 | 第104-108页 |
| 6.2.1 NRAMP1转基因牛精准打靶验证 | 第104-106页 |
| 6.2.2 NRAMP1转基因牛的抗结核能力验证 | 第106-108页 |
| 6.3 结果 | 第108-116页 |
| 6.3.1 NRAMP1转基因牛精准打靶验证 | 第108-111页 |
| 6.3.2 NRAMP1转基因牛的抗结核能力验证 | 第111-116页 |
| 6.4 讨论 | 第116-118页 |
| 6.5 小结 | 第118-119页 |
| 全文结论 | 第119-120页 |
| 创新之处与进一步研究课题 | 第120-121页 |
| 创新之处 | 第120页 |
| 进一步研究课题 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-142页 |
| 附录 | 第142-166页 |
| 缩略词 | 第166-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 作者简介 | 第170页 |
