| 摘要 | 第5-7页 |
| Summary | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 流感病毒的感染机制及分离培养 | 第11-13页 |
| 1.2 呼吸道合胞病毒的感染机制及分离培养 | 第13-16页 |
| 1.3 病毒感染的细胞免疫机制 | 第16-17页 |
| 1.4 Th1,Th2,Th17和Treg细胞 | 第17-18页 |
| 1.5 实验思路 | 第18-19页 |
| 第一部分 病毒的准备 | 第19-27页 |
| 1.1 材料 | 第19页 |
| 1.1.1 病毒 | 第19页 |
| 1.1.2 设备和仪器 | 第19页 |
| 1.2 试验方法 | 第19-24页 |
| 1.2.1 细胞及培养体系 | 第19-20页 |
| 1.2.2 PR8病毒毒种在鸡胚中扩增 | 第20-21页 |
| 1.2.3 血凝抑制实验(HA test)滴定病毒血凝效价 | 第21页 |
| 1.2.4 细胞复苏及扩增 | 第21-22页 |
| 1.2.5 Vero细胞扩增流感病毒 | 第22页 |
| 1.2.6 Hep-2细胞扩增RSV毒种 | 第22页 |
| 1.2.8 Vero细胞扩增RSV病毒 | 第22-23页 |
| 1.2.9 病奉CCID_50助的检測 | 第23-24页 |
| 1.2.9.1 用MDCK细胞测定PR8的CCID_(50) | 第23-24页 |
| 1.2.9.2 用Hep-2细胞测定RSV的CCID_(50) | 第24页 |
| 1.3 结果 | 第24-26页 |
| 1.3.1 PR8 CCID_(50)及血凝效价 | 第24-25页 |
| 1.3.2 RSV CCID_(50) | 第25-26页 |
| 1.4 小结 | 第26-27页 |
| 第二部分 H1N1和RSV双重感染BALB/c小鼠的研究 | 第27-76页 |
| 1.1 材料 | 第28-29页 |
| 1.1.1 试剂耗材及试剂盒 | 第28页 |
| 1.1.2 实验动物 | 第28-29页 |
| 1.1.3 病毒和攻毒剂量 | 第29页 |
| 1.1.4 仪器设备 | 第29页 |
| 1.2 实验方法 | 第29-44页 |
| 1.2.1 动物分组 | 第29页 |
| 1.2.2 攻毒方法 | 第29-30页 |
| 1.2.3 小鼠腹腔主动脉采血,取脾脏 | 第30-31页 |
| 1.2.4 小鼠脾淋巴细胞分离 | 第31-32页 |
| 1.2.5 淋巴细胞表面分子标记 | 第32页 |
| 1.2.6 小鼠肺灌洗液BALF收集及细胞涂片制备 | 第32-33页 |
| 1.2.7 BALF中细胞因子检测 | 第33页 |
| 1.2.8 小鼠肺组织获取及固定 | 第33页 |
| 1.2.9 小鼠肺组织切片及HE染色 | 第33-35页 |
| 1.2.10 小鼠肺组织悬液制备 | 第35页 |
| 1.2.11 噬斑法检测肺悬液的病毒 | 第35-36页 |
| 1.2.12 小鼠肺总RNA提取 | 第36-37页 |
| 1.2.13 病毒RNA提取 | 第37页 |
| 1.2.14 普通RT-PCR检测肺部病毒 | 第37页 |
| 1.2.15 病毒检测引物及探针 | 第37-38页 |
| 1) 定量引物及探针设计 | 第37-38页 |
| 2) 引物和探针的特异性和灵敏性 | 第38页 |
| 1.2.16 病毒拷贝数定量参考标准品RNA制备 | 第38-41页 |
| 1) 基因片段选择和引物设计 | 第38-39页 |
| 2) T7启动子序列构建 | 第39-40页 |
| 3) 参考标准品RNA体外转录及纯化 | 第40-41页 |
| 1.2.17 小鼠肺组织病毒载量检测 | 第41页 |
| 1.2.18 病毒拷贝数计算 | 第41-42页 |
| 1.2.19 小鼠呼吸道病理切片制备 | 第42页 |
| 1.2.20 病理切片HE染色 | 第42页 |
| 1.2.21 石蜡切片免疫组化(IHC)检测抗原 | 第42-44页 |
| 1.3 结果及分析 | 第44-65页 |
| 1.3.1 小鼠表现及体重检测 | 第44-45页 |
| 1.3.2 病原学分析 | 第45-48页 |
| 1.3.2.1 双重感染的建立 | 第45-46页 |
| 1.3.2.2 病毒载量检测 | 第46-48页 |
| 1.3.3 小鼠肺石蜡切片HE染色分析,免疫组化检测病毒 | 第48-57页 |
| 1.3.4 病理研究小结 | 第57-58页 |
| 1.3.5 BALF中细胞因子浓度 | 第58-60页 |
| 1.3.6 淋巴细胞及Th细胞亚群的免疫机制 | 第60-65页 |
| 1.3.6.1 CD3+,CD4+,CD8+细胞比例 | 第61-62页 |
| 1.3.6.2 Th1和Th2细胞 | 第62-63页 |
| 1.3.6.3 Th17细胞比例分析 | 第63-64页 |
| 1.3.6.4 Treg细胞比例分析 | 第64-65页 |
| 1.4 讨论 | 第65-75页 |
| 1.4.1 病毒性呼吸道感染的常见临床症状 | 第65-68页 |
| 1.4.2 双重感染中的抗病毒免疫机制 | 第68-73页 |
| 1.4.3 Th亚群相关性分析 | 第73-75页 |
| 1.5 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 附录Ⅰ 主要溶液配制 | 第88-90页 |
| 附录Ⅱ 文中提到缩格词对照 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 研究生简介 | 第92-93页 |
