| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-44页 |
| 第一节 无脊椎动物的固有免疫系统 | 第15-24页 |
| 一、非己的识别 | 第16-19页 |
| 1. 模式识别理论 | 第17页 |
| 2. 病原相关分子模式 | 第17-18页 |
| 3. 模式识别受体 | 第18-19页 |
| 二、免疫信号的调整和放大 | 第19-21页 |
| 1. Toll/dif 途径 | 第19-20页 |
| 2. Imd/Rrelish 途径 | 第20-21页 |
| 三、病原体的清除 | 第21-24页 |
| 1. 细胞免疫 | 第21-23页 |
| 2. 体液免疫 | 第23-24页 |
| 第二节 模式识别受体概述 | 第24-39页 |
| 一、C 型凝集素 | 第24-33页 |
| 1.C 型凝集素的结构 | 第25-27页 |
| 2.C 型凝集素的分类 | 第27-28页 |
| 3.C 型凝集素的功能 | 第28-33页 |
| 二、肽聚糖识别蛋白 | 第33-36页 |
| 1. 肽聚糖识别蛋白的结构与分类 | 第33-34页 |
| 2. 肽聚糖识别蛋白的功能 | 第34-36页 |
| 三、脂多糖和β-1,3-葡聚糖结合蛋白 | 第36-37页 |
| 四、其他模式识别受体 | 第37-39页 |
| 1.T oll 样受体 | 第37-38页 |
| 2. 硫依赖型凝集素 | 第38页 |
| 3. 清道夫受体 | 第38-39页 |
| 4. 含硫酯蛋白 | 第39页 |
| 第三节 海洋无脊椎动物模式识别受体研究进展 | 第39-43页 |
| 一、C 型凝集素 | 第40-41页 |
| 二、肽聚糖识别蛋白 | 第41页 |
| 三、脂多糖和β-1,3-葡聚糖结合蛋白 | 第41页 |
| 四、其他模式识别受体 | 第41-43页 |
| 第四节 本研究的目的和意义 | 第43-44页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第44-59页 |
| 第一节 实验材料 | 第44-45页 |
| 一、实验动物与菌株 | 第44页 |
| 二、主要试剂 | 第44-45页 |
| 三、主要仪器 | 第45页 |
| 第二节 实验方法 | 第45-59页 |
| 一、序列与结构特征分析 | 第45页 |
| 二、栉孔扇贝cDNA 模板的制备 | 第45-46页 |
| 1. 扇贝的PAMPs 免疫刺激 | 第45页 |
| 2. 扇贝总RNA 的提取 | 第45-46页 |
| 3. 扇贝cDNA 模板第一链的合成 | 第46页 |
| 三、荧光实时定量PCR | 第46-47页 |
| 四、蛋白的原核重组表达和纯化 | 第47-50页 |
| 1. 质粒的提取 | 第47-48页 |
| 2. 重组质粒的构建 | 第48页 |
| 3. 重组蛋白的表达与检测 | 第48-49页 |
| 4. 重组蛋白的纯化 | 第49页 |
| 5. 重组蛋白的复性与浓度测定 | 第49-50页 |
| 五、定点突变分析 | 第50-51页 |
| 1. 定点突变 | 第50-51页 |
| 2. 突变体蛋白的重组表达 | 第51页 |
| 六、多克隆抗体的制备与Cy3 标记 | 第51-53页 |
| 1. 多克隆抗体的制备 | 第51页 |
| 2. 多克隆抗体特异性的检测 | 第51-52页 |
| 3. 多克隆抗体的纯化与Cy3 标记 | 第52-53页 |
| 七、免疫荧光分析 | 第53页 |
| 1. 组织材料处理 | 第53页 |
| 2. 免疫荧光染色 | 第53页 |
| 八、免疫组织化学分析 | 第53-55页 |
| 1. 组织材料处理 | 第53-54页 |
| 2. 免疫组织化学染色 | 第54-55页 |
| 九、重组蛋白的PAMPs 结合活性分析 | 第55-56页 |
| 1. PAMPs 生物芯片法 | 第55-56页 |
| 2. 酶联免疫吸附（ELISA）法 | 第56页 |
| 十、重组蛋白对扇贝血细胞体外吞噬与包囊化作用的促进 | 第56-57页 |
| 1. 吞噬作用 | 第56-57页 |
| 2. 包囊化作用 | 第57页 |
| 十一、重组蛋白的凝菌活性分析 | 第57-58页 |
| 十二、重组蛋白的抑菌活性分析 | 第58页 |
| 十三、重组蛋白的酰胺酶活性分析 | 第58-59页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第59-99页 |
| 第一节 栉孔扇贝单结构域C 型凝集素的免疫应答机制 | 第59-69页 |
| 一、实验结果 | 第59-65页 |
| 1. CfLec-1 和CfLec-2 对PAMPs 刺激的响应 | 第59-60页 |
| 2. CfLec-1 和CfLec-2 重组蛋白的制备 | 第60-61页 |
| 3. CfLec-1 和CfLec-2 多克隆抗体的制备 | 第61-62页 |
| 4. CfLec-1 和CfLec-2 蛋白在组织中的分布 | 第62-63页 |
| 5. CfLec-1 和CfLec-2 的PAMPs 结合活性 | 第63页 |
| 6. CfLec-1 和CfLec-2 对栉孔扇贝血细胞包囊化作用的促进 | 第63-65页 |
| 二、讨论 | 第65-69页 |
| 第二节 栉孔扇贝多结构域C 型凝集素的免疫应答机制 | 第69-84页 |
| 一、实验结果 | 第69-78页 |
| 1. CfLec-3 对PAMPs 刺激的响应 | 第69-70页 |
| 2. CfLec-3 及其3 个CRD 重组蛋白的制备 | 第70-71页 |
| 3. CfLec-3 多克隆抗体的制备与Cy3 标记 | 第71页 |
| 4. CfLec-3 及其3 个CRD 的PAMPs 结合活性 | 第71-73页 |
| 5. CfLec-3 的免疫组织化学分析 | 第73页 |
| 6. CfLec-3 及其3 个CRD 对栉孔扇贝血细胞包囊化作用的促进 | 第73-75页 |
| 7. CfLec-3 及其3 个CRD 对栉孔扇贝血细胞吞噬作用的促进 | 第75页 |
| 8. CfLec-3 中3 个CRD 的序列与结构特征 | 第75-77页 |
| 9. CfLec-3 的定点突变分析 | 第77-78页 |
| 10. 突变体CRD 的PAMPs 结合活性 | 第78页 |
| 二、讨论 | 第78-84页 |
| 第三节 栉孔扇贝肽聚糖识别蛋白的免疫应答机制 | 第84-92页 |
| 一、实验结果 | 第84-90页 |
| 1. CfPGRP-51 对PAMPs 刺激的响应 | 第84-85页 |
| 2. CfPGRP-51 重组蛋白的制备 | 第85页 |
| 3. CfPGRP-51 多克隆抗体的制备 | 第85-86页 |
| 4. CfPGRP-51 蛋白在组织中的分布 | 第86-87页 |
| 5. CfPGRP-51 的PAMPs 结合活性 | 第87页 |
| 6. CfPGRP-51 的凝菌活性 | 第87-88页 |
| 7. CfPGRP-51 的抑菌活性 | 第88-89页 |
| 8. CfPGRP-51 的酰胺酶活性 | 第89-90页 |
| 二、讨论 | 第90-92页 |
| 第四节 栉孔扇贝脂多糖和β-1,3-葡聚糖结合蛋白的免疫应答机制 | 第92-99页 |
| 一、实验结果 | 第92-97页 |
| 1. CfLGBP 对PAMPs 刺激的响应 | 第92-93页 |
| 2. CfLGBP 重组蛋白的制备 | 第93-94页 |
| 3. CfLGBP 多克隆抗体的制备 | 第94-95页 |
| 4. CfLGBP 蛋白在组织中的分布 | 第95页 |
| 5. CfLGBP 的PAMPs 结合活性 | 第95-96页 |
| 6. CfLGBP 的凝菌活性 | 第96-97页 |
| 二、讨论 | 第97-99页 |
| 第四章 结论 | 第99-102页 |
| 参考文献 | 第102-123页 |
| 附录 | 第123-124页 |
| 博士期间发表和完成的论文 | 第124-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
