| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略语或符号表 | 第7-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-18页 |
| 1.1.1 非洲猪瘟的传播历史和地理分布 | 第13-14页 |
| 1.1.2 非洲猪瘟的分子流行病学研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.3 非洲猪瘟的传播途径 | 第15-16页 |
| 1.1.4 非洲猪瘟的实验室诊断方法研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.5 非洲猪瘟疫苗的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.1.6 非洲猪瘟侵入我国的风险 | 第18页 |
| 1.2 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.3 研究技术路线 | 第19-22页 |
| 第2章 非洲猪瘟病毒P54蛋白的原核表达及抗原性检测 | 第22-30页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.2.2 方法 | 第24-26页 |
| 2.3 结果 | 第26-28页 |
| 2.3.1 目的片断的PCR扩增 | 第26页 |
| 2.3.2 表达质粒的构建及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.3 p54蛋白的表达 | 第27-28页 |
| 2.3.4 p54表达产物的分析与纯化 | 第28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-30页 |
| 第3章 非洲猪瘟病毒P54蛋白的真核表达及抗原性检测 | 第30-39页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 材料与方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 材料 | 第30-31页 |
| 3.2.2 方法 | 第31-33页 |
| 3.3 结果 | 第33-37页 |
| 3.3.1 ASFV p54目的基因扩增的鉴定 | 第33页 |
| 3.3.2 pFast Bac–p54的构建和鉴定 | 第33-35页 |
| 3.3.3 重组粘粒Bacmid的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.4 细胞转染和目的蛋白表达 | 第36-37页 |
| 3.3.5 重组蛋白表达检测 | 第37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 3.5 小结 | 第38-39页 |
| 第4章 非洲猪瘟病毒P54蛋白抗原表位预测与验证 | 第39-46页 |
| 4.1 非洲猪瘟病毒P54蛋白抗原表位预测 | 第39-41页 |
| 4.2 间接ELISA方法验证非洲猪瘟病毒P54蛋白抗原表位 | 第41-45页 |
| 4.2.1 材料与方法 | 第41-43页 |
| 4.2.2 结果 | 第43-45页 |
| 4.2.3 讨论 | 第45页 |
| 4.3 小结 | 第45-46页 |
| 第5章 非洲猪瘟病毒P54蛋白单克隆抗体的制备 | 第46-52页 |
| 5.1 引言 | 第46页 |
| 5.2 材料与方法 | 第46-48页 |
| 5.2.1 动物 | 第46页 |
| 5.2.2 细胞株与菌种 | 第46页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第46-47页 |
| 5.2.4 免疫抗原的制备 | 第47页 |
| 5.2.5 筛选抗原的制备 | 第47页 |
| 5.2.6 动物免疫 | 第47页 |
| 5.2.7 特定表位阳性杂交瘤细胞株的建立 | 第47页 |
| 5.2.8 非洲猪瘟p54单克隆抗体的制备 | 第47页 |
| 5.2.9 单克隆抗体亚类鉴定 | 第47-48页 |
| 5.2.10 单克隆抗体特异性鉴定 | 第48页 |
| 5.2.11 单克隆抗体亲和性分析 | 第48页 |
| 5.3 结果 | 第48-51页 |
| 5.3.1 p54蛋白的免疫抗原的获取及鉴定 | 第48页 |
| 5.3.2 筛选抗原的获取 | 第48-49页 |
| 5.3.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第49页 |
| 5.3.4 单克隆抗体亚类的鉴定 | 第49页 |
| 5.3.5 单克隆抗体特异性鉴定 | 第49-50页 |
| 5.3.6 单克隆抗体亲和性分析 | 第50-51页 |
| 5.4 讨论 | 第51页 |
| 5.5 小结 | 第51-52页 |
| 第6章 非洲猪瘟P54蛋白B细胞表面抗原位点的精确定位 | 第52-61页 |
| 6.1 引言 | 第52页 |
| 6.2 材料与方法 | 第52-53页 |
| 6.2.1 ASFV p54免疫抗原的获取 | 第52页 |
| 6.2.2 ASFV p54蛋白的真核表达 | 第52页 |
| 6.2.3 人工合成多肽 | 第52页 |
| 6.2.4 参考血清 | 第52页 |
| 6.2.5 间接ELISA试验 | 第52页 |
| 6.2.6 Western-blot检测 | 第52-53页 |
| 6.2.7 单克隆抗体的制备 | 第53页 |
| 6.2.8 阻断ELISA试验 | 第53页 |
| 6.2.9 多肽与单克隆抗体的相互作用 | 第53页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第53-60页 |
| 6.3.1 原核表达的p54蛋白具有良好的免疫原性 | 第53-54页 |
| 6.3.2 真核表达的p54蛋白具有良好的抗原性 | 第54页 |
| 6.3.3 单克隆抗体的获取与鉴定 | 第54-55页 |
| 6.3.4 抗原表位氨基酸序列的确定 | 第55-59页 |
| 6.3.5 p54蛋白中的保守位点 | 第59-60页 |
| 6.4 小结 | 第60-61页 |
| 第7章 竞争酶联免疫吸附试验方法的建立及临床应用 | 第61-74页 |
| 7.1 引言 | 第61页 |
| 7.2 材料与方法 | 第61-65页 |
| 7.2.1 血清和c-ELISA试剂盒 | 第61页 |
| 7.2.2 竞争ELISA实验所需主要试剂 | 第61-62页 |
| 7.2.3 包被抗原的制备 | 第62页 |
| 7.2.4 单克隆抗体的制备 | 第62页 |
| 7.2.5 单克隆抗体的纯化与酶标 | 第62-63页 |
| 7.2.6 竞争ELISA操作程序 | 第63页 |
| 7.2.7 竞争ELISA方法实验条件的优化 | 第63-64页 |
| 7.2.8 竞争ELISA方法结果判定阈值确定 | 第64页 |
| 7.2.9 竞争ELISA方法重复性实验 | 第64页 |
| 7.2.10 竞争ELISA方法灵敏度实验 | 第64-65页 |
| 7.2.11 竞争ELISA方法特异性实验 | 第65页 |
| 7.2.12 竞争ELISA方法符合性实验 | 第65页 |
| 7.2.13 竞争ELISA方法的临床应用 | 第65页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第65-73页 |
| 7.3.1 包被抗原种类筛选 | 第65页 |
| 7.3.2 包被抗原浓度的筛选 | 第65-66页 |
| 7.3.3 单抗的纯化与酶标记 | 第66-67页 |
| 7.3.4 最佳酶标单抗孵育时间的筛选 | 第67页 |
| 7.3.5 底物显色时间的选择 | 第67页 |
| 7.3.6 竞争ELISA方法临界值及判定标准 | 第67-68页 |
| 7.3.7 竞争ELISA方法重复性验证试验 | 第68-69页 |
| 7.3.8 竞争ELISA方法灵敏度试验 | 第69-70页 |
| 7.3.9 竞争ELISA方法特异性验证实验 | 第70-71页 |
| 7.3.10 竞争ELISA方法符合性验证试验 | 第71-72页 |
| 7.3.11 竞争ELISA方法的临床应用 | 第72-73页 |
| 7.4 小结 | 第73-74页 |
| 第8章 全文结论 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 附录A | 第80-98页 |
| 附录B | 第98-99页 |
| 附录C | 第99-100页 |
| 附录D | 第100-101页 |
| 附录E | 第101-103页 |
