| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 肝纤维化概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 肝纤维化简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 肝纤维化发病机制 | 第13-14页 |
| 1.2 肝纤维化治疗现状 | 第14-16页 |
| 1.3 胰岛素样生长因子-1 | 第16-19页 |
| 1.3.1 IGF-1 的发现 | 第17页 |
| 1.3.2 IGF-1 的结构及功能 | 第17-18页 |
| 1.3.3 IGF-1 与肝纤维化 | 第18-19页 |
| 1.4 转化生长因子 β 受体 2 | 第19-21页 |
| 1.4.1 TGF-β1 与肝纤维化 | 第19-20页 |
| 1.4.2 转化生长因子 β 受体 2 | 第20-21页 |
| 1.5 长效融合蛋白的研发 | 第21页 |
| 1.6 中国仓鼠卵巢细胞表达系统 | 第21-23页 |
| 1.6.1 简介 | 第21-22页 |
| 1.6.2 表达现状 | 第22-23页 |
| 1.7 研究背景及研究内容 | 第23-25页 |
| 1.7.1 研究背景及立题依据 | 第23-24页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 人血清白蛋白与IGF-1 融合蛋白在CHO细胞中的表达 | 第25-43页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 菌种、质粒及细胞株 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要仪器及试剂 | 第26页 |
| 2.2.3 培养基与主要溶液 | 第26-27页 |
| 2.2.4 CHO细胞的培养 | 第27-28页 |
| 2.2.5 重组表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.6 CHO重组细胞株的构建与筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.7 重组蛋白的Dot blot和Western blot鉴定 | 第29页 |
| 2.2.8 HSA-IGF-1 稳定表达细胞株的悬浮驯化及批次实验 | 第29页 |
| 2.2.9 HSA-IGF-1 稳定表达细胞株的摇瓶流加培养 | 第29-30页 |
| 2.2.10 HSA-IGF-1 融合蛋白的分离纯化 | 第30页 |
| 2.2.11 HSA-IGF-1 融合蛋白的活性测定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-42页 |
| 2.3.1 重组表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.2 CHO重组细胞株的筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.3 HSA-IGF-1 稳定表达细胞株的批次实验 | 第33-34页 |
| 2.3.4 HSA-IGF-1 稳定表达细胞株的 3 L摇瓶流加实验 | 第34-35页 |
| 2.3.5 HSA-IGF-1 融合蛋白的分离纯化 | 第35-37页 |
| 2.3.6 HSA-IGF-1 融合蛋白的活性测定 | 第37-42页 |
| 2.4 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 人血清白蛋白与eTGFBR2融合蛋白的重组表达 | 第43-57页 |
| 3.1 前言 | 第43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 菌种、质粒及细胞株 | 第43页 |
| 3.2.2 主要仪器及试剂 | 第43页 |
| 3.2.3 培养基与主要溶液 | 第43-44页 |
| 3.2.4 细胞的培养 | 第44页 |
| 3.2.5 重组载体的构建 | 第44页 |
| 3.2.6 HSA-eTGFBR2稳定表达CHO细胞株的构建 | 第44页 |
| 3.2.7 HSA-eTGFBR2稳定表达细胞株的摇瓶流加培养 | 第44-45页 |
| 3.2.8 HSA-eTGFBR2融合蛋白的分离纯化 | 第45页 |
| 3.2.9 HSA-eTGFBR2融合蛋白的活性测定 | 第45-47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-56页 |
| 3.3.1 重组表达载体的构建 | 第47页 |
| 3.3.2 CHO重组细胞株的筛选 | 第47-48页 |
| 3.3.3 HSA-eTGFBR2稳定表达细胞株的批次实验 | 第48-49页 |
| 3.3.4 HSA-eTGFBR2稳定表达细胞株的 3 L摇瓶流加实验 | 第49-50页 |
| 3.3.5 HSA-eTGFBR2融合蛋白的分离纯化 | 第50-52页 |
| 3.3.6 HSA-eTGFBR2融合蛋白的活性测定 | 第52-56页 |
| 3.4 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2体外抗肝纤维化活性分析 | 第57-71页 |
| 4.1 前言 | 第57页 |
| 4.2 材料与方法 | 第57-60页 |
| 4.2.1 细胞因子与细胞株 | 第57页 |
| 4.2.2 主要仪器及试剂 | 第57-58页 |
| 4.2.3 CCl4诱导肝损伤模型的建立 | 第58页 |
| 4.2.4 HSA-IGF-1 对CCl4诱导肝损伤模型的保护作用 | 第58页 |
| 4.2.5 HSA-IGF-1 解除TGF-β1 对L-02 细胞生长的抑制作用 | 第58页 |
| 4.2.6 HSA-eTGFBR2拮抗TGF-β1 诱导的HSC细胞增殖 | 第58-59页 |
| 4.2.7 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2对HSC细胞活化指标mRNA水平的影响 | 第59页 |
| 4.2.8 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2对HSC细胞 α-SMA、COLⅠ表达的影响 | 第59-60页 |
| 4.2.9 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2对HSC细胞COLⅠ、COLⅢ分泌的影响 | 第60页 |
| 4.2.10 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2对TGF-β1/Smads信号通路的影响 | 第60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-69页 |
| 4.3.1 HSA-IGF-1 对CCl4诱导肝损伤模型的保护作用 | 第60-62页 |
| 4.3.2 HSA-IGF-1 降低TGF-β1 对L-02 细胞增殖的抑制作用 | 第62-64页 |
| 4.3.3 HSA-TGFBR2解除TGF-β1 对HSC细胞增殖的促进作用 | 第64-65页 |
| 4.3.4 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2降低HSC细胞活化指标的mRNA水平 | 第65-67页 |
| 4.3.5 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2降低HSC细胞 α-SMA、COLⅠ的表达水平 | 第67-68页 |
| 4.3.6 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2降低HSC细胞COLⅠ、COLⅢ的分泌水平 | 第68页 |
| 4.3.7 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2对TGF-β1/Smads信号通路的影响 | 第68-69页 |
| 4.4 小结 | 第69-71页 |
| 第五章 HSA-IGF-1 和HSA-eTGFBR2体内抗肝纤维化活性分析 | 第71-83页 |
| 5.1 前言 | 第71页 |
| 5.2 材料与方法 | 第71-74页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第71-72页 |
| 5.2.2 主要仪器及试剂 | 第72页 |
| 5.2.3 主要溶液 | 第72页 |
| 5.2.4 动物模型建立及给药 | 第72-73页 |
| 5.2.5 实验动物取材 | 第73页 |
| 5.2.6 制备肝组织切片 | 第73页 |
| 5.2.7 肝组织切片的苏木素-伊红染色 | 第73页 |
| 5.2.8 肝组织切片的Masson染色 | 第73-74页 |
| 5.2.9 血清AST、ALT、TBIL、HA活性测定 | 第74页 |
| 5.2.10 Western Blot检测肝组织中 α-SMA和COLⅠ的表达 | 第74页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第74-82页 |
| 5.3.1 小鼠一般情况观察 | 第74页 |
| 5.3.2 小鼠肝脏外观变化 | 第74-76页 |
| 5.3.3 肝组织切片的苏木素-伊红染色 | 第76-78页 |
| 5.3.4 肝组织切片的Masson染色 | 第78-79页 |
| 5.3.5 肝功能指标变化 | 第79-81页 |
| 5.3.6 各组小鼠肝组织 α-SMA和COLⅠ表达水平的变化 | 第81-82页 |
| 5.4 小结 | 第82-83页 |
| 主要结论与展望 | 第83-85页 |
| 主要结论 | 第83页 |
| 展望 | 第83-85页 |
| 论文主要创新点 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第94页 |
