| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1 诱导胚胎干细胞分化成雄性生殖细胞方法 | 第10-14页 |
| 2 CRISPR/Cas9技术研究进展 | 第14-16页 |
| 3 研究目的与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 鸡C1EIS基因cDNA序列的克隆与生物信息学分析 | 第18-27页 |
| 1 材料与方法 | 第18-22页 |
| 1.1 材料 | 第18-19页 |
| 1.1.1 实验材料与试剂 | 第18页 |
| 1.1.2 主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| 1.1.3 引物设计与合成 | 第19页 |
| 1.2 方法 | 第19-22页 |
| 1.2.1 鸡睾丸组织总RNA提取 | 第19页 |
| 1.2.2 反转录睾丸组织cDNA | 第19-20页 |
| 1.2.3 C1EIS基因克隆 | 第20-21页 |
| 1.2.4 C1EIS基因TA克隆测序 | 第21-22页 |
| 1.2.5 C1EIS基因生物信息学分析 | 第22页 |
| 2 结果 | 第22-26页 |
| 2.1 C1EIS基因克隆 | 第22页 |
| 2.2 C1EIS基因生物信息学分析 | 第22-26页 |
| 2.2.1 C1EIS蛋白理化性质分析 | 第22-23页 |
| 2.2.2 C1EIS蛋白信号肽与亚细胞定位分析 | 第23页 |
| 2.2.3 C1EIS蛋白糖基化位点和磷酸化位点分析 | 第23-25页 |
| 2.2.4 C1EIS蛋白质二级结构和三级结分析 | 第25页 |
| 2.2.5 系统进化分析 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26页 |
| 4 小结 | 第26-27页 |
| 第三章 C1EIS基因CRISPR/Cas9载体构建与活性验证 | 第27-37页 |
| 1 材料与方法 | 第27-31页 |
| 1.1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 实验材料与试剂 | 第27-28页 |
| 1.1.2 主要仪器和设备 | 第28页 |
| 1.1.3 主要试剂配制 | 第28页 |
| 1.2 方法 | 第28-31页 |
| 1.2.1 C1EIS靶位点设计与合成 | 第28页 |
| 1.2.2 寡核苷酸链杂交 | 第28页 |
| 1.2.3 pcDNA3.0质粒酶切 | 第28-29页 |
| 1.2.4 sgRNA,C1EIS与载体连接 | 第29页 |
| 1.2.5 载体转化 | 第29页 |
| 1.2.6 菌液PCR检测与过表达载体酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 1.2.7 鸡DF-1细胞培养传代 | 第30页 |
| 1.2.8 细胞转染 | 第30-31页 |
| 1.2.9 流式细胞分选 | 第31页 |
| 1.2.10 T7E1酶切与TA克隆检测CRISPR/Cas载体活性 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-35页 |
| 2.1 载体结构与靶位点设计 | 第31-33页 |
| 2.2 sgRNA鉴定 | 第33页 |
| 2.3 pcDNA3.0-C1EIS载体鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4 鸡DF-1细胞培养 | 第34页 |
| 2.5 CRISPR/Cas9载体转染条件探索 | 第34-35页 |
| 2.6 CRISPR/Cas系统在DF-1细胞系上敲除C1EIS基因 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 4 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 C1EIS基因对鸡胚胎干细向雄性生殖细胞分化的影响 | 第37-45页 |
| 1 材料和方法 | 第37-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第37页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第37-38页 |
| 1.3 主要试剂 | 第38页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第38页 |
| 1.5 细胞处理及分组 | 第38页 |
| 1.6 免疫细胞化学检测 | 第38-39页 |
| 1.7 荧光定量PCR检测 | 第39页 |
| 1.8 流式细胞检测 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-44页 |
| 2.1 鸡ESCs鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2 ESC形态学变化 | 第41页 |
| 2.3 细胞免疫化学检测 | 第41-42页 |
| 2.4 流式细胞检测 | 第42-43页 |
| 2.5 Quantitative Real Time PCR(QRT—PCR)检测 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 全文结论与创新 | 第45-46页 |
| 结论 | 第45页 |
| 创新 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第54-55页 |
