| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第15-25页 |
| 1.1 原发性肝细胞癌研究现状 | 第15-18页 |
| 1.1.1 引起HCC发生和发展的重要因素 | 第16页 |
| 1.1.2 HCC临床表现及治疗 | 第16-18页 |
| 1.2 原发性肝细胞癌对肝药酶的影响及研究概况 | 第18-22页 |
| 1.2.1 有关肝药酶的研究概况 | 第18-20页 |
| 1.2.2 药物代谢酶与肿瘤的关系研究概况 | 第20-22页 |
| 1.3 立题依据 | 第22-25页 |
| 1.3.1 研究意义 | 第22-23页 |
| 1.3.2 研究目标 | 第23-25页 |
| 第二章 临床HCC肝组织样本收集及处理方法 | 第25-35页 |
| 2.1 临床病例信息 | 第25-26页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.3 HCC肝S9的制备及总蛋白浓度的测定 | 第27-31页 |
| 2.3.1 HCC肝S9所需溶液的配制 | 第27-28页 |
| 2.3.2 肝S9制备流程 | 第28-29页 |
| 2.3.3 检测肝S9总蛋白含量 | 第29-31页 |
| 2.4 提取HCC肝组织总RNA | 第31-35页 |
| 2.4.1 配制提RNA过程所必需的溶液 | 第31页 |
| 2.4.2 提取HCC肝组织总RNA的实验步骤 | 第31-34页 |
| 2.4.3 合成cDNA | 第34-35页 |
| 第三章 HCC肿瘤组织S9中SULTs酶蛋白含量变化研究 | 第35-78页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第36-37页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第36-37页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-61页 |
| 3.3.1 Isotope Label-free UHPLC-MS/MS测定人肝组织样本中目标蛋白基本原理 | 第37-39页 |
| 3.3.2 计算机筛选特异性探针多肽设计 | 第39-41页 |
| 3.3.3 特异性探针多肽LC-MS/MS检测方法的建立 | 第41-47页 |
| 3.3.4 肝S9蛋白水解方法的建立 | 第47-48页 |
| 3.3.5 固相萃取(SPE)方法的建立 | 第48-49页 |
| 3.3.6 方法学验证 | 第49-55页 |
| 3.3.7 测定10例正常人肝组织S9、癌旁和HCC肿瘤组织中SULTs酶的蛋白含量 | 第55-56页 |
| 3.3.8 运用Western-blot方法定量分析正常人肝组织S9中SULTs蛋白表达水平 | 第56-58页 |
| 3.3.9 分别运用Isotope Label-free UHPLC-MS/MS和Western-blot方法对人源重组化SULTs蛋白进行定性分析 | 第58页 |
| 3.3.10 数据处理及统计学分析 | 第58-61页 |
| 3.4 实验结果 | 第61-74页 |
| 3.4.1 10例正常人肝组织S9中SULTs酶的蛋白表达含量 | 第61-68页 |
| 3.4.2 混合10例正常人肝组织S9、癌旁和HCC肿瘤组织S9中SULTs酶的蛋白含量 | 第68-70页 |
| 3.4.3 个体癌旁和HCC肿瘤组织S9中SULTs酶的蛋白含量差异性 | 第70-74页 |
| 3.5 讨论与结论 | 第74-78页 |
| 第四章 HCC肿瘤组织S9中SULTs酶活性及其对白藜芦醇代谢处置变化研究 | 第78-131页 |
| 4.1 引言 | 第78-80页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第80-82页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第80页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第80-81页 |
| 4.2.3 所需溶液配制 | 第81-82页 |
| 4.3 HCC肿瘤组织S9中SULTs酶活性变化研究 | 第82-121页 |
| 4.3.1 SULT1A1探针底物对硝基苯酚的酶代动力学研究 | 第82-91页 |
| 4.3.2 SULT1A3探针底物多巴胺的酶代动力学研究 | 第91-100页 |
| 4.3.3 SULT1B1探针底物邻氨基苯酚的酶代动力学研究 | 第100-105页 |
| 4.3.4 SULT1E1探针底物17β-雌二醇的酶代动力学研究 | 第105-111页 |
| 4.3.5 SULT2A1探针底物去氢表雄酮的酶代动力学研究 | 第111-117页 |
| 4.3.6 个体正常人肝组织S9中5种SULTs酶探针底物代谢速率研究 | 第117-118页 |
| 4.3.7 HCC肿瘤组织S9中SULTs酶蛋白分子催化能力变化研究 | 第118-121页 |
| 4.4 HCC肿瘤组织S9中SULTs酶对白藜芦醇代谢处置能力变化研究 | 第121-126页 |
| 4.4.1 UHPLC-MS/MS检测方法 | 第121-122页 |
| 4.4.2 标准曲线的制备 | 第122-123页 |
| 4.4.3 建立白藜芦醇在人肝S9中Ⅱ相代谢反应体系 | 第123页 |
| 4.4.4 白藜芦醇在混合的正常人肝组织S9、癌旁和HCC肿瘤组织S9中的的酶代动力学研究 | 第123-124页 |
| 4.4.5 白藜芦醇在个体正常人肝组织S9、癌旁和HCC肿瘤组织S9中的代谢速率对比研究 | 第124页 |
| 4.4.6 数据处理及统计学分析 | 第124页 |
| 4.4.7 实验结果 | 第124-126页 |
| 4.5 讨论与结论 | 第126-131页 |
| 第五章 HCC肿瘤组织S9中SULTs酶基因表达水平变化研究 | 第131-151页 |
| 5.1 引言 | 第131页 |
| 5.2 仪器与试剂 | 第131-132页 |
| 5.2.1 主要仪器 | 第131-132页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第132页 |
| 5.3 实验方法 | 第132-136页 |
| 5.3.1 PCR引物设计与合成 | 第132页 |
| 5.3.2 荧光实时定量PCR的基本操作步骤 | 第132-133页 |
| 5.3.3 数据处理及统计学分析 | 第133-136页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第136-151页 |
| 第六章 SULTs酶活性、蛋白含量和基因表达水平相关性分析 | 第151-160页 |
| 6.1 实验方法 | 第151页 |
| 6.1.1 数据处理方法 | 第151页 |
| 6.1.2 统计学分析 | 第151页 |
| 6.2 实验结果 | 第151-158页 |
| 6.2.1 癌旁和HCC肿瘤组织S9中SULTs酶活性、蛋白含量和基因表达水平三者之间的相关性分析 | 第151-152页 |
| 6.2.2 SULTs酶在癌旁和HCC肿瘤组织S9中对白藜芦醇代谢处置能力与其表达水平相关性分析 | 第152-158页 |
| 6.3 讨论与结论 | 第158-160页 |
| 第七章 结论和展望 | 第160-165页 |
| 参考文献 | 第165-172页 |
| 缩略词 | 第172-174页 |
| 攻读学位期间成果 | 第174-175页 |
| 致谢 | 第175-176页 |
