| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 研究背景与立题依据 | 第14-36页 |
| 1.1 木质纤维素类生物质 | 第14-20页 |
| 1.1.1 木质纤维素抗降解屏障 | 第14-18页 |
| 1.1.2 木质纤维素底物的预处理 | 第18-20页 |
| 1.2 木质纤维素降解所需酶类及其应用 | 第20-32页 |
| 1.2.1 纤维素酶 | 第21-22页 |
| 1.2.2 半纤维素酶 | 第22-25页 |
| 1.2.3 氧化还原酶类 | 第25-30页 |
| 1.2.4 果胶和木素降解酶 | 第30-31页 |
| 1.2.5 其他辅助因子 | 第31-32页 |
| 1.3 木质纤维素降解酶基因表达系统 | 第32-35页 |
| 1.3.1 原核表达系统 | 第33-34页 |
| 1.3.2 酵母表达系统 | 第34页 |
| 1.3.3 丝状真菌表达系统 | 第34-35页 |
| 1.4 本论文的立题依据和研究内容 | 第35-36页 |
| 第二章 木质纤维素降解酶库的构建、性质研究与初步应用 | 第36-68页 |
| 引言 | 第36-37页 |
| 2.1 材料和方法 | 第37-54页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第37页 |
| 2.1.2 培养基 | 第37-38页 |
| 2.1.3 常用溶液 | 第38-42页 |
| 2.1.4 酶制剂、常用试剂和器材 | 第42-43页 |
| 2.1.5 草酸青霉总RNA提取和cDNA合成 | 第43-44页 |
| 2.1.6 木质纤维素降解相关酶基因的克隆与表达载体构建 | 第44-46页 |
| 2.1.7 重组质粒转化毕赤酵母 | 第46-48页 |
| 2.1.8 毕赤酵母转化子的筛选 | 第48页 |
| 2.1.9 目标蛋白的表达 | 第48-49页 |
| 2.1.10 目标蛋白的纯化和透析 | 第49-50页 |
| 2.1.11 蛋白浓度的测定和SDS-PAGE分析 | 第50-51页 |
| 2.1.12 生物信息学分析 | 第51页 |
| 2.1.13 酶活力测定 | 第51-53页 |
| 2.1.14 酶最适温度、最适pH、温度稳定性、pH稳定性的测定 | 第53页 |
| 2.1.15 添加β-葡萄糖苷酶对草酸青霉酶系糖化能力的影响 | 第53-54页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第54-65页 |
| 2.2.1 木质纤维素降解酶库的成员与转录水平分析 | 第54-57页 |
| 2.2.2 木质纤维素降解酶库成员的表达与纯化 | 第57-58页 |
| 2.2.3 木质纤维素降解酶库成员的酶学性质表征 | 第58-60页 |
| 2.2.4 草酸青霉木质纤维素降解酶系性质的研究 | 第60-64页 |
| 2.2.5 木质纤维素降解酶库在酶系改造中的初步应用 | 第64-65页 |
| 2.3 本章小结 | 第65-68页 |
| 第三章 阿拉伯呋喃糖苷酶Abf43D等半纤维素酶促进木质纤维素降解的应用与机理研究 | 第68-84页 |
| 引言 | 第68页 |
| 3.1 材料和方法 | 第68-72页 |
| 3.1.1 菌株 | 第68页 |
| 3.1.2 培养基 | 第68页 |
| 3.1.3 常用溶液 | 第68-69页 |
| 3.1.4 酶制剂、常用试剂和器材 | 第69页 |
| 3.1.5 半纤维素酶类的表达和纯化 | 第69页 |
| 3.1.6 木质纤维素糖化中半纤维素酶的添加 | 第69-70页 |
| 3.1.7 Abf43D促进糖化的机理探究 | 第70-72页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第72-82页 |
| 3.2.1 添加不同半纤维素酶对SP糖化四种预处理底物的影响 | 第72-76页 |
| 3.2.2 Abf43D促进糖化效果的机理探究 | 第76-82页 |
| 3.3 本章小结 | 第82-84页 |
| 第四章 醛糖酸内酯酶AltA缓解β-葡萄糖苷酶抑制的机理研究与应用 | 第84-104页 |
| 引言 | 第84-85页 |
| 4.1 材料和方法 | 第85-89页 |
| 4.1.1 菌株 | 第85页 |
| 4.1.2 培养基 | 第85页 |
| 4.1.3 常用溶液 | 第85-86页 |
| 4.1.4 酶制剂、常用试剂和器材 | 第86页 |
| 4.1.5 目标蛋白的表达和纯化 | 第86页 |
| 4.1.6 黑曲霉和里氏木霉粗酶液的制备 | 第86-87页 |
| 4.1.7 β-葡萄糖苷酶和β-木糖苷酶酶抑制物的分析 | 第87页 |
| 4.1.8 AltA系统进化树的构建 | 第87页 |
| 4.1.9 AltA底物特异性分析 | 第87-88页 |
| 4.1.10 液相色谱-高分辨质谱法分析AltA产物 | 第88页 |
| 4.1.11 添加AltA对β-葡萄糖苷酶活力抑制的影响 | 第88页 |
| 4.1.12 添加AltA对木质纤维素糖化的影响及机理探究 | 第88-89页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第89-101页 |
| 4.2.1 β-葡萄糖苷酶和β-木糖苷酶酶活抑制物的探究 | 第89-92页 |
| 4.2.2 AltA系统进化树和转录水平分析 | 第92-93页 |
| 4.2.3 AltA底物特异性和产物分析 | 第93-95页 |
| 4.2.4 添加AltA对β-葡萄糖苷酶活力和木质纤维素糖化的影响 | 第95-99页 |
| 4.2.5 AltA缓解β-葡萄糖苷酶抑制的机理探究 | 第99-101页 |
| 4.3 本章小结 | 第101-104页 |
| 第五章 裂解性多糖单加氧酶-醛糖酸内酯酶-β-葡萄糖苷酶体系在木质纤维素降解中的应用与优化 | 第104-120页 |
| 引言 | 第104页 |
| 5.1 材料和方法 | 第104-107页 |
| 5.1.1 菌株 | 第104页 |
| 5.1.2 培养基 | 第104页 |
| 5.1.3 常用溶液 | 第104-105页 |
| 5.1.4 酶制剂、常用试剂和仪器 | 第105页 |
| 5.1.5 LPMO1的生物信息学分析 | 第105页 |
| 5.1.6 LPMO1-AltA-BG体系水解磷酸膨胀纤维素 | 第105页 |
| 5.1.7 添加LPMO1-AltA-BGL1体系对SP糖化微晶纤维素的影响 | 第105-106页 |
| 5.1.8 添加LPMO1-AltA-BGL1对SP糖化预处理底物的影响 | 第106页 |
| 5.1.9 混料设计优化LPMO1-AltA-BG协同体系配比 | 第106-107页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第107-117页 |
| 5.2.1 序列分析与同源建模 | 第107-111页 |
| 5.2.2 LPMO1-AltA-BGL1协同降解磷酸膨胀纤维素 | 第111-112页 |
| 5.2.3 添加LPMO1-AltA-BGL1促进SP糖化微晶纤维素 | 第112-113页 |
| 5.2.4 添加LPMO1-AltA-BLG1促进SP糖化预处理底物 | 第113-115页 |
| 5.2.5 LPMO1-AltA-BGL1协同体系配比的优化 | 第115-117页 |
| 5.3 本章小结 | 第117-120页 |
| 论文创新性结果总结与展望 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-140页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第140-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第143页 |
