| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略符号说明 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-21页 |
| 1.1 喹诺酮类及β-内酰胺类抗生素简介 | 第16-17页 |
| 1.1.1 喹诺酮类 | 第16-17页 |
| 1.1.2 β-内酰胺类 | 第17页 |
| 1.2 耐药介导类型 | 第17-18页 |
| 1.2.1 染色体介导的耐药类型 | 第17-18页 |
| 1.2.2 质粒介导的耐药类型 | 第18页 |
| 1.3 质粒介导的耐药机制 | 第18-20页 |
| 1.3.1 质粒介导的喹诺酮耐药基因的耐药机制 | 第18-19页 |
| 1.3.2 质粒介导的β-内酰胺类耐药机制 | 第19-20页 |
| 1.4 课题意义及立体依据 | 第20-21页 |
| 第二章 样品采集和处理 | 第21-27页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 水样采集 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验仪器及材料 | 第22页 |
| 2.2.3 实验试剂与配方 | 第22-23页 |
| 2.3 实验步骤 | 第23-25页 |
| 2.3.1 样品前处理 | 第23页 |
| 2.3.2 总基因组DNA提取 | 第23页 |
| 2.3.3 基因组DNA质量检测 | 第23-24页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| 2.3.5 测量基因组DNA的浓度及纯度 | 第25页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第25-27页 |
| 2.4.1 PCR结果 | 第25-26页 |
| 2.4.2 基因组DNA浓度与纯度的检测 | 第26-27页 |
| 第三章 质粒介导的喹诺酮耐药基因、β-内酰胺类耐药基因的定量检测 | 第27-52页 |
| 3.1 引言 | 第27页 |
| 3.2 实验材料、仪器 | 第27-30页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第27-28页 |
| 3.2.2 实验试剂与材料 | 第28-30页 |
| 3.3 实验方法及步骤 | 第30-38页 |
| 3.3.1 各耐药基因阳性菌株的筛选及耐药基因扩增 | 第30页 |
| 3.3.2 菌种挑取、接种 | 第30页 |
| 3.3.3 细菌总基因组的提取(CTAB法) | 第30-31页 |
| 3.3.4 基因组提取质量检测 | 第31页 |
| 3.3.5 耐药基因检测 | 第31-33页 |
| 3.3.6 测序验证 | 第33页 |
| 3.3.7 耐药基因扩增片段的胶回收 | 第33页 |
| 3.3.8 T-A克隆连接耐药基因与载体 | 第33-34页 |
| 3.3.9 感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 3.3.10 化学法转化 | 第35页 |
| 3.3.11 碱裂解法提取质粒 | 第35-36页 |
| 3.3.12 质粒的验证 | 第36页 |
| 3.3.13 标准质粒拷贝数的计算 | 第36页 |
| 3.3.14 标准质粒的梯度稀释 | 第36-37页 |
| 3.3.15 用q-PCR生成标准曲线 | 第37-38页 |
| 3.3.16 样本中生物量统计 | 第38页 |
| 3.3.17 污水样本中各耐药基因的定量检测 | 第38页 |
| 3.3.18 数据处理 | 第38页 |
| 3.4 实验结果 | 第38-51页 |
| 3.4.1 各耐药基因标准曲线 | 第38-41页 |
| 3.4.2 各样本中的16S rDNA基因含量 | 第41-42页 |
| 3.4.3 各污水采样点中各耐药基因统计 | 第42-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 污水中耐药基因相关性分析 | 第52-62页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料及方法 | 第52-56页 |
| 4.2.1 齐鲁医院采样点各耐药基因间的相关性 | 第52-53页 |
| 4.2.2 小清河采样点各耐药基因间的相关性 | 第53-54页 |
| 4.2.3 光大污水处理厂采样点各耐药基因间的相关性 | 第54-55页 |
| 4.2.4 省中医医院采样点各耐药基因间的相关性 | 第55-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-60页 |
| 4.3.1 齐鲁医院采样点各耐药基因相关性 | 第56-57页 |
| 4.3.2 小清河采样点各耐药基因之间的相关性 | 第57页 |
| 4.3.3 光大污水处理厂各耐药基因之间的相关性 | 第57-59页 |
| 4.3.4 中医医院采样点各耐药基因之间的相关性 | 第59页 |
| 4.3.5 污水总样本中耐药基因之间的相关性分析 | 第59-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-62页 |
| 第五章 污水样本的菌群结构及其与耐药基因的相关性研究 | 第62-70页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 实验材料及试剂 | 第62页 |
| 5.3 实验步骤 | 第62-63页 |
| 5.3.1 污水样本总基因组的菌群结构分析 | 第62页 |
| 5.3.2 菌群结构与耐药基因间的相关性分析 | 第62-63页 |
| 5.4 实验结果 | 第63-69页 |
| 5.4.1 污水中细菌多样性分析 | 第63-66页 |
| 5.4.2 耐药基因与菌群之间的相关性分析 | 第66-69页 |
| 5.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 第六章 全文总结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第80页 |
