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副溶血弧菌诱导的Notch分子参与天然免疫应答作用的初步研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
第一章 前言第11-25页
 1 副溶血弧菌第11-13页
   ·副溶血弧菌引起的疾病第11页
   ·影响副溶血弧菌数量的环境因子第11-12页
   ·非可培养状态第12页
   ·副溶血弧菌的致病因素第12-13页
     ·耐热直接溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)第12-13页
     ·TDH相关溶血素(TDH-related hemolysin,TRH)第13页
 2 斑马鱼第13-18页
   ·斑马鱼简介第13-14页
   ·斑马鱼作为疾病模型的优势第14-15页
   ·病原菌感染斑马鱼的途径第15-16页
   ·斑马鱼中参与免疫调节的基因第16-18页
 3 Notch信号通路第18-22页
   ·Notch信号通路简介第18页
   ·Notch基因结构组成第18-19页
   ·Notch信号通路第19-21页
   ·Notch信号在先天免疫中的作用第21页
   ·Notch信号在感染性疾病中的作用第21-22页
 4 CRISPR/Cas9 基因编辑技术第22-25页
   ·CRISPR/Cas9 基因编辑技术简介第22-23页
   ·CRISPR/Cas9 系统优势第23-24页
   ·CRISPR/Cas9 系统在斑马鱼中的应用第24-25页
第二章 副溶血弧菌感染斑马鱼模型的建立及毒力比较第25-40页
 1 实验材料第25-26页
   ·实验用鱼第25-26页
   ·实验菌株第26页
   ·主要试剂第26页
   ·主要仪器第26页
 2 实验方法第26-28页
   ·菌液准备第26-27页
   ·Vp人工感染斑马鱼的预实验第27页
   ·Vp人工感染斑马鱼的正式实验第27页
   ·LD50的计算方法第27-28页
 3 实验结果第28-37页
   ·预实验结果第28页
   ·ATCC17802 感染斑马鱼LD_(50)的计算结果第28-30页
   ·Vp13 感染斑马鱼LD_(50)的计算结果第30-31页
   ·ATCC33847 感染斑马鱼LD_(50)的计算结果第31-32页
   ·Vp57 感染斑马鱼LD_(50)的计算结果第32-34页
   ·Vp31 感染斑马鱼LD_(50)的计算结果第34-35页
   ·Vp41 感染斑马鱼LD_(50)的计算结果第35-36页
   ·不同计算方法比较各菌株毒力结果第36-37页
 4 讨论第37-40页
第三章 Q-PCR检测Notch信号通路相关因子表达量变化第40-51页
 1 实验材料第41页
   ·主要试剂第41页
   ·主要仪器第41页
   ·实验材料第41页
 2 实验方法第41-45页
   ·菌液准备第41-42页
   ·斑马鱼卵及幼鱼的浸泡感染第42页
   ·Trizol法提取胚胎的总RNA第42-43页
   ·反转录获得cDNA第43页
   ·荧光定量PCR(Q-PCR)检测Notch信号通路基因的变化第43-45页
 3 实验结果第45-49页
 4 讨论第49-51页
第四章 利用CRISPR/Cas9 基因敲除技术制备notch1a、notch1b突变体第51-68页
 1 实验材料第51-52页
   ·菌株和质粒第51-52页
   ·主要试剂第52页
   ·主要仪器第52页
 2 实验方法第52-59页
   ·靶位点的选择原则第52页
   ·gRNA合成第52-56页
   ·Cas9 mRNA合成第56-57页
   ·制备F0 斑马鱼与靶点突变效率检测第57-58页
   ·检测F0 代斑马鱼生殖细胞对突变的遗传(germline transmission)第58页
   ·筛选携带靶位点突变的F1 代成鱼斑马鱼第58页
   ·筛选F2 代notch1a突变的纯合子斑马鱼第58-59页
 3 实验结果第59-66页
   ·notch1a突变体制备第59-63页
     ·F0- notch1a基因敲除检测结果第59-61页
     ·F0- notch1a germline transmition检测结果第61页
     ·notch1a F1 代突变体成年斑马鱼检测第61-63页
     ·notch1a突变体F2 代纯合子筛选第63页
   ·notch1b基因敲除第63-66页
     ·F0- notch1b基因敲除检测第63-65页
     ·F0- notch1b-001 germline transmission检测第65页
     ·notch1b F1 代突变体成年斑马鱼检测第65-66页
     ·notch1b突变体F2 代纯合子筛选第66页
 4.讨论第66-68页
全文总结及展望第68-69页
参考文献第69-80页
致谢第80页

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