| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第9-15页 |
| 1 绪论 | 第15-27页 |
| ·纤维素酶(CELLULASE) | 第15-17页 |
| ·纤维二糖酶 | 第17-20页 |
| ·纤维二糖酶的理化性质 | 第17-18页 |
| ·纤维二糖酶的分类 | 第18页 |
| ·纤维二糖酶的作用机制 | 第18-19页 |
| ·纤维二糖酶的底物特异性 | 第19页 |
| ·纤维二糖酶的活性测定 | 第19-20页 |
| ·纤维二糖酶的应用 | 第20-21页 |
| ·在食品领域中的应用 | 第20页 |
| ·在医药领域中的应用 | 第20-21页 |
| ·纤维二糖酶的其它应用 | 第21页 |
| ·纤维二糖基因工程研究进展 | 第21-23页 |
| ·纤维二糖酶基因的克隆 | 第21-22页 |
| ·纤维二糖酶基因的原核表达 | 第22-23页 |
| ·纤维二糖酶基因的真核表达 | 第23页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第23-25页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母发酵优化 | 第25页 |
| ·研究的目的及内容 | 第25-27页 |
| ·研究目的、意义 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| 2 纤维二糖酶基因的克隆及鉴定 | 第27-38页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·酶与试剂 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·溶液配制 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·黑曲霉C112总RNA的提取 | 第29页 |
| ·cDNA单链的合成 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第31页 |
| ·PCR产物与载体的连接 | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第32-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-37页 |
| ·黑曲霉C112总RNA的提取及纤维二糖酶基因的PCR扩增结果 | 第34-35页 |
| ·重组克隆的蓝白斑筛选 | 第35页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第35-36页 |
| ·克隆基因序列分析 | 第36-37页 |
| ·小结与讨论 | 第37-38页 |
| 3 纤维二糖酶基因真核表达载体的构建 | 第38-45页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·菌种与质粒 | 第38页 |
| ·仪器设备 | 第38页 |
| ·酶与试剂 | 第38-39页 |
| ·质粒pPIC9K的物理图谱 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·溶液配制 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·纤维二糖酶基因的回收 | 第39-40页 |
| ·真核表达载体pPIC9K质粒的回收 | 第40页 |
| ·纤维二糖酶基因和真核表达载体质粒的连接 | 第40-41页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌Trans5α | 第41页 |
| ·重组转化子的鉴定 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-44页 |
| ·重组质粒和表达载体pPIC9K的双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体PCR鉴定 | 第43页 |
| ·重组表达载体的双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·小结与讨论 | 第44-45页 |
| 4 纤维二糖酶基因电击转化毕赤酵母 | 第45-54页 |
| ·材料 | 第45-47页 |
| ·菌种与试剂 | 第45页 |
| ·仪器设备 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·溶液配制 | 第46-47页 |
| ·试验方法 | 第47-50页 |
| ·重组质粒pPIC9K-bg1线性化 | 第47页 |
| ·毕赤酵母SMD1168感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| ·毕赤酵母的化学转化 | 第48页 |
| ·重组酵母PCR鉴定和测序鉴定 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-52页 |
| ·重组酵母菌PCR检测结果 | 第50-51页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳检测结果 | 第51-52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-54页 |
| 5 重组毕赤酵母产酶活性测定 | 第54-61页 |
| ·材料与方法 | 第54-55页 |
| ·菌种 | 第54页 |
| ·仪器与设备 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54页 |
| ·溶液配制 | 第54-55页 |
| ·试验方法 | 第55-57页 |
| ·粗酶液的制备 | 第55页 |
| ·重组毕赤酵母菌纤维二糖酶活力测定 | 第55-56页 |
| ·纤维二糖酶最适反应温度和温度稳定性的测定 | 第56页 |
| ·纤维二糖酶最适反应pH和pH温度性的测定 | 第56页 |
| ·金属离子和化学试剂对酶活力的影响 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-60页 |
| ·重组毕赤酵母菌纤维二糖酶活性测定结果 | 第57页 |
| ·温度对纤维二糖酶酶活力和稳定的影响 | 第57-58页 |
| ·pH对纤维二糖酶酶活力和稳定的影响 | 第58-59页 |
| ·金属离子和化学试剂对纤维二糖酶酶活力的影响 | 第59-60页 |
| ·小结与讨论 | 第60-61页 |
| 6 重组毕赤酵母产纤维二糖酶发酵工艺优化 | 第61-72页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·菌种与试剂 | 第61页 |
| ·仪器与设备 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61-62页 |
| ·产物的测定 | 第62页 |
| ·试验方法 | 第62-63页 |
| ·重组毕赤酵母菌株种子液的培养 | 第62页 |
| ·发酵培养基单因素试验 | 第62-63页 |
| ·响应面优化 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-71页 |
| ·纤维二糖酶标准曲线 | 第63页 |
| ·培养基发酵工艺条件的确定 | 第63-67页 |
| ·响应面分析法优化培养条件 | 第67-71页 |
| ·最佳工艺条件预测与试验验证 | 第71页 |
| ·小结与讨论 | 第71-72页 |
| 7 重组毕赤酵母产纤维二糖酶发酵动力学研究 | 第72-81页 |
| ·材料与方法 | 第72-73页 |
| ·菌种与试剂 | 第72页 |
| ·仪器与设备 | 第72-73页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·试验方法 | 第73-75页 |
| ·斜面种子培养 | 第73页 |
| ·摇瓶种子培养 | 第73页 |
| ·分批发酵 | 第73页 |
| ·分析方法 | 第73-75页 |
| ·试验数据的测定 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-79页 |
| ·重组毕赤酵母产纤维二糖酶发酵过程中代谢变化规律 | 第75-76页 |
| ·分批发酵动力学模型的建立 | 第76-79页 |
| ·小结与讨论 | 第79-81页 |
| 8 结论与展望 | 第81-84页 |
| ·结论 | 第81-82页 |
| ·展望 | 第82-84页 |
| 9 创新 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 附录 | 第93-94页 |
| 攻读学位期间的主要学术成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |