| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| ·甘蓝孢子体型自交不亲和性的分子研究 | 第13-16页 |
| ·植物的自交不亲和性 | 第13页 |
| ·甘蓝孢子体型自交不亲和性的分子机理和信号传导网络 | 第13-16页 |
| ·甘蓝自交不亲和性SRK下游信号底物的探究 | 第16-19页 |
| ·泛素系统研究进展 | 第16-17页 |
| ·自交不亲和反应中的ARC1—E3泛素连接酶 | 第17-19页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第19-21页 |
| ·酵母双杂交技术的基本原理 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交技术的优缺点 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交技术的发展 | 第21页 |
| ·GST pull-down技术 | 第21-23页 |
| ·GST pull-down技术原理 | 第21-22页 |
| ·GST pull-down技术在蛋白互作中的应用 | 第22-23页 |
| 第二章 引言 | 第23-25页 |
| ·研究的目的与意义 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 第三章 基于转录组分析和qRT-PCR的甘蓝柱头PUB蛋白基因的筛选 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·主要生化试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·甘蓝柱头中总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·合成cDNA第一链 | 第27-28页 |
| ·甘蓝转录组测序试验 | 第28页 |
| ·甘蓝PUB蛋白基因的时空表达特异性分析 | 第28-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·甘蓝柱头总RNA质量检测 | 第30页 |
| ·甘蓝柱头转录组测序分析与基因筛选 | 第30-31页 |
| ·甘蓝PUB蛋白基因的时空表达特异性分析 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-35页 |
| 第四章 甘蓝PUB蛋白基因的克隆和序列分析 | 第35-47页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·试验菌株和载体 | 第35页 |
| ·主要生化试剂 | 第35页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·甘蓝PUB蛋白基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·生物信息学分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-45页 |
| ·PUB蛋白、ARC1和SRK的基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·BoSU03基因的c DNA和推导的氨基酸序列分析 | 第39-40页 |
| ·BoSU05基因的c DNA和推导的氨基酸序列分析 | 第40-41页 |
| ·BoSU07基因的c DNA和推导的氨基酸序列分析 | 第41-42页 |
| ·BoSU11基因的c DNA和推导的氨基酸序列分析 | 第42-44页 |
| ·甘蓝PUB蛋白与ARC1的遗传进化分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 酵母双杂交系统检验甘蓝PUB蛋白与SRK胞內域之间相互作用 | 第47-59页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·试验菌株和载体 | 第47页 |
| ·主要生化试剂 | 第47页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-51页 |
| ·酵母双杂交重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·质粒酶切并连接酵母载体 | 第48-49页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌与重组质粒鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒的毒性检测和自激活检测 | 第49-51页 |
| ·LiAc法制备酵母感受态AH109 | 第49-50页 |
| ·PEG/LiAc法转化酵母感受态 | 第50页 |
| ·重组质粒的毒性检测 | 第50页 |
| ·重组载体的自激活检测 | 第50-51页 |
| ·PUB蛋白与SRK的相互作用检测 | 第51页 |
| ·阳性转化酵母的 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-56页 |
| ·构建酵母重组质粒及酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·酵母重组载体的毒性检测 | 第52-53页 |
| ·酵母重组载体的自激活检测 | 第53-54页 |
| ·差异表达PUB蛋白和SRK胞內域的相互作用检测 | 第54-55页 |
| ·阳性转化酵母的 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-59页 |
| 第六章 BoSU07、BoSU11与SRK相互作用的GST pull-down技术体外检测 | 第59-67页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·菌液与载体 | 第59页 |
| ·主要生化试剂 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-62页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·融合蛋白的体外表达及纯化 | 第60-62页 |
| ·重组载体的转化 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白的初步纯化 | 第61页 |
| ·GST pull-down鉴定BoSU07、BoSU11与SRK胞內域的相互作用 | 第61-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-65页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第62页 |
| ·重组载体的转化 | 第62-63页 |
| ·BoSU07与SRK胞內域相互作用的体外检测 | 第63-64页 |
| ·BoSU11与SRK胞內域相互作用的体外检测 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第七章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 附录 | 第79-82页 |
| 在校期间发表文章、参加项目及会议情况 | 第82页 |
