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番茄水通道蛋白在干旱胁迫及果实成熟过程中的功能分析

摘要第1-4页
Abstract第4-10页
1 前言第10-18页
   ·水通道蛋白的研究进展第10-16页
     ·水通道蛋白的发现及其结构特征第10-12页
     ·植物水通道蛋白的功能第12-14页
     ·植物水通道蛋白的调控方式第14-16页
   ·植物水通道蛋白对水分胁迫的响应第16页
   ·植物水通道蛋白与果实发育成熟的关系第16-17页
   ·研究目的及意义第17-18页
2 响应干旱胁迫的番茄水通道蛋白基因筛选及功能分析第18-43页
   ·材料与方法第18-28页
     ·实验材料第18页
     ·番茄不同组织总RNA的提取第18页
     ·逆转录合成cDNA第一链第18-19页
     ·番茄水通道蛋白基因引物筛选及荧光定量实验第19-23页
     ·SlPIP2;1,SlPIP2;7和SlPIP2;5导水性测定第23-24页
       ·非洲爪蟾卵母细胞的获得第23页
       ·质粒的构建及体外cRNA合成第23页
       ·卵母细胞微注射第23页
       ·渗透水通透势Pf值计算第23页
       ·导水性抑制实验第23-24页
     ·亚细胞定位及原位杂交第24-25页
       ·载体构建第24页
       ·基因枪轰击重组质粒及荧光观察第24-25页
       ·原位杂交实验第25页
     ·SlPIP2;1,SlPIP2;7和SlPIP2;5对干旱胁迫及盐胁迫的响应第25页
       ·番茄根系导水率的测定第25页
       ·干旱胁迫及盐胁迫下SlPIP2;1,SlPIP2;7和SlPIP2;5表达量变化第25页
     ·SlPIP2;1,SlPIP2;7和SlPIP2;5载体的构建及番茄和拟南芥的转化第25-28页
       ·农杆菌感受态的制备及转化第25-26页
       ·SlPIP2s基因过表达载体pCAMBIA1302-SlPIP2s的构建第26页
       ·农杆菌介导的番茄和拟南芥的遗传转化第26页
       ·转基因植株的分子检测第26-27页
       ·转基因植株的生理检测第27-28页
   ·结果与分析第28-42页
     ·番茄水通道蛋白PIP及TIP家族基因在不同部位表达水平第28-30页
     ·爪蟾卵母细胞中SlPIP2; 1,SlPIP2;7和SlPIP2;5导水性分析第30-33页
       ·爪蟾卵母细胞体积变化第30-31页
       ·SlPIP2s水导度(Pf)第31-32页
       ·SlPIP2s水导度受到胞间及胞内pH及Hg的影响第32-33页
     ·亚细胞定位及原位杂交结果第33-34页
     ·SlPIP2;1,SlPIP2;7和SlPIP2;5对干旱胁迫及盐胁迫的响应第34-36页
       ·番茄根系导水率测定第34页
       ·SlPIP2;1,SlPIP2;7和SlPIP2;5基因表达量测定第34-36页
     ·过表达SlPIP2;1,SlPIP2;7和SlPIP2;5植株的获得及生理检测第36-42页
       ·过表达载体的构建第36-37页
       ·过表达载体转化拟南芥和番茄及转基因植株的分子检测第37-38页
       ·过表达植株生理指标的鉴定第38-42页
   ·讨论与分析第42-43页
3 番茄果实发育过程中主效水通道蛋白基因的筛选及功能分析第43-52页
   ·材料与方法第43-46页
     ·植物材料第43页
     ·番茄果实发育各个时期水通道蛋白基因表达量的测定第43页
     ·番茄果实发育各个时期内源激素测定第43-44页
     ·外源生长素处理番茄果实后果实中水通道蛋白基因的测定第44页
     ·番茄水通道蛋白基因过表达载体的构建第44-45页
     ·过表达水通道蛋白基因的植株生理指标的测定第45-46页
   ·结果与分析第46-51页
     ·番茄果实发育过程中主效水通道蛋白基因的筛选第46-47页
     ·番茄果实发育过程中内源激素的测定第47-48页
     ·SlPIP2;4过表达载体的构建及番茄遗传转化第48-49页
     ·SlPIP2;4过表达植株果实表型观察第49-51页
   ·讨论与分析第51-52页
4 乙烯及其抑制剂处理对番茄采后时期水通道蛋白表达的影响第52-62页
   ·材料与方法第52-55页
     ·植物材料第52页
     ·乙烯及其抑制剂处理番茄采后果实第52页
     ·乙烯及其抑制剂处理番茄果实失水量及糖酸比测定第52-53页
     ·受乙烯及其抑制剂调控的番茄水通道蛋白基因的筛选第53页
     ·病毒诱导的基因沉默VIGS技术实验方法第53-55页
       ·目的基因片段的克隆及载体构建第53页
       ·含有重组质粒pTRV2-SlPIP1;4/SIETRs的农杆菌侵染第53-55页
   ·结果与分析第55-61页
     ·乙烯及其抑制剂处理对番茄果实外形及生理指标影响第55-56页
     ·响应乙烯及其抑制剂的水通道蛋白基因的筛选第56-58页
     ·SlPIP1;4在S1ETRs沉默番茄果实中的表达第58页
     ·SlPIP1;4基因沉默的番茄果实失水量测定第58-61页
   ·讨论与分析第61-62页
5 结论第62-64页
参考文献第64-71页
附录第71-77页
致谢第77-79页
作者介绍第79-80页

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