| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-14页 |
| ·Brachyury基因的概述 | 第10-12页 |
| ·Brachyury的结构 | 第10-11页 |
| ·Brachyury的表达与基本功能研究 | 第11页 |
| ·Brachy ury与胚胎发育 | 第11-12页 |
| ·绵羊品种资源简介 | 第12-13页 |
| ·蒙古羊简介 | 第12-13页 |
| ·三种品系绵羊在进化上的关系 | 第13-14页 |
| 2 试验一 乌珠穆沁绵羊、巴尔虎羊、呼伦贝尔短尾羊Brachyury基因组序列测定及分析 | 第14-33页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·采样 | 第14页 |
| ·载体和菌种 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第14-15页 |
| ·方法 | 第15-19页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第15页 |
| ·PCR及反应条件 | 第15-17页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第17页 |
| ·目的片段的纯化和回收 | 第17-18页 |
| ·连接克隆载体 | 第18页 |
| ·转化 | 第18页 |
| ·重组子的菌落PCR鉴定 | 第18-19页 |
| ·测序 | 第19页 |
| ·序列分析 | 第19页 |
| ·结果 | 第19-31页 |
| ·Brachyury基因的扩增与克隆 | 第19-21页 |
| ·重组子的菌落PCR鉴定结果 | 第21-23页 |
| ·重组子测序鉴定 | 第23-30页 |
| ·遗传进化分析 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·影响PCR反应扩增成功率的主要因素 | 第31-32页 |
| ·关于绵羊Brachyury基因序列的问题讨论 | 第32页 |
| ·结论 | 第32-33页 |
| 3 试验二 海兰褐鸡胚胎Brachyury基因的原核表达 | 第33-50页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·引物 | 第33页 |
| ·质粒和感受态细胞 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-40页 |
| ·总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR | 第34-35页 |
| ·PCR产物的凝胶电泳检测 | 第35页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第35页 |
| ·连接克隆载体 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·重组克隆载体PMD—Brachyury的提取 | 第35-36页 |
| ·重组子测序鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·Brachyury蛋白的表达 | 第37-39页 |
| ·重组蛋白表达最佳诱导条件的确定 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-48页 |
| ·海兰褐鸡胚胎总RNA的提取 | 第40页 |
| ·海兰褐Brachyury基因的扩增 | 第40-41页 |
| ·序列分析 | 第41-42页 |
| ·海兰褐鸡胚胎Brachyury cDNA与其它脊椎动物的Brachyury cDNA的同源性比较比较 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白的SDS—PAGE分析 | 第44页 |
| ·目的蛋白的Western—blot检测与分析 | 第44-45页 |
| ·表达产物的可溶性的Western—blot检测与分析 | 第45页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第48页 |
| ·选择宿主菌BL21(DE3)及pET-32a表达系统的原因 | 第48页 |
| ·海兰褐鸡胚胎Brachyury蛋白的原核表达 | 第48页 |
| ·结论 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录 | 第55-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
