| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·烟草病害介绍 | 第9页 |
| ·马铃薯Y病毒对烟草的危害 | 第9-10页 |
| ·马铃薯Y病毒的致病机理 | 第10-11页 |
| ·植物miRNA的研究进展 | 第11-20页 |
| ·miRNA的发现及特征 | 第11页 |
| ·植物miRNA的合成与作用方式 | 第11-13页 |
| ·MiRNA调控植物发育 | 第13-14页 |
| ·MiRNA途径介导的基因表达 | 第14-15页 |
| ·MiRNA在逆境中的响应机制 | 第15-16页 |
| ·MiRNA的研究方法 | 第16-20页 |
| ·MiRNA对植物病毒的响应 | 第20-21页 |
| ·研究的来源及目的意义 | 第21-23页 |
| ·研究课题的来源 | 第21页 |
| ·研究的目的意义 | 第21-23页 |
| 2 筛选烟草抗PVY的miRNA | 第23-33页 |
| ·材料与方法 | 第23-26页 |
| ·烟草总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·烟草sRNA序列分析 | 第24页 |
| ·烟草miRNA注释分析 | 第24页 |
| ·烟草miRNA深层分析 | 第24-25页 |
| ·差异表达的miRNA杂交验证 | 第25-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-33页 |
| ·RNA质量电泳结果 | 第26-27页 |
| ·SRNA测序结果 | 第27页 |
| ·SRNA长度分析 | 第27-29页 |
| ·烟草sRNA注释分析 | 第29页 |
| ·烟草miRNA深层分析 | 第29-32页 |
| ·差异表达的miRNA杂交验证 | 第32-33页 |
| 3 Nta-miR396b的抗马铃薯Y病毒功能分析 | 第33-46页 |
| ·材料与方法 | 第33-40页 |
| ·合成nta-miR396b的前体序列 | 第33页 |
| ·超量表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·Nta-miR396b表达载体转化大肠杆菌 | 第34-35页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第35-37页 |
| ·烟草叶片基因组DNA提取 | 第37页 |
| ·基因组DNA进行PCR检测 | 第37页 |
| ·转基因烟草Southern杂交验证 | 第37-39页 |
| ·转基因烟草的抗病性鉴定 | 第39页 |
| ·病毒含量测定 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·合成nta-miR396b前体序列 | 第40页 |
| ·Nta-miR396b超量表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·Nta-miR396b超量表达载体的转化大肠杆菌 | 第41页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第41-43页 |
| ·PCR检测 | 第43-44页 |
| ·Southern杂交验证 | 第44页 |
| ·转基因烟草抗病性鉴定 | 第44-45页 |
| ·病毒含量测定 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-56页 |
| 附录 | 第56-112页 |
| 个人简介 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |