| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-28页 |
| 第一节 乳酸链球菌素nisin的主要研究 | 第14-20页 |
| ·羊毛硫抗生素简介 | 第14页 |
| ·乳酸链球菌素nisin研究概况 | 第14-16页 |
| ·乳酸链球菌素nisin相关蛋白研究概况 | 第16-20页 |
| ·NisB对nisin前体中特定丝氨酸和苏氨酸进行脱水 | 第17-18页 |
| ·NisC催化羊毛硫环的形成 | 第18-19页 |
| ·NisT负责修饰后nisin前体的跨膜运输 | 第19页 |
| ·NisI和NisFEG使乳酸乳球菌具有对nisin的免疫性 | 第19页 |
| ·NisRK双组分调节系统调节nisin的生物合成 | 第19-20页 |
| ·NisP切除nisin前体的前导肽 | 第20页 |
| 第二节 Nisin前导肽酶NisP相关研究 | 第20-26页 |
| ·丝氨酸蛋白酶研究概况 | 第20-22页 |
| ·枯草杆菌酶研究概况 | 第22-23页 |
| ·NisP相关研究概况 | 第23-26页 |
| ·nisP基因的发现 | 第23-24页 |
| ·NisP负责nisin前体中前导肽的切除 | 第24页 |
| ·NisP是定位于细胞表面的丝氨酸蛋白酶 | 第24-26页 |
| 第三节 本论文的研究目的、意义及内容 | 第26-27页 |
| 第四节 论文结构安排 | 第27-28页 |
| 第二章 NisP蛋白的晶体学研究 | 第28-56页 |
| 第一节 NisP的基因克隆和表达 | 第28-37页 |
| ·nisP基因克隆和表达载体构建 | 第28-32页 |
| ·nisP基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·NisP表达载体的构建 | 第29-32页 |
| ·NisP蛋白的表达 | 第32-33页 |
| ·NisP过量表达菌株的获得 | 第32页 |
| ·NisP蛋白的大规模表达 | 第32-33页 |
| ·NisP蛋白的纯化 | 第33-37页 |
| ·亲和层析 | 第33-34页 |
| ·阴离子交换层析 | 第34-36页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第36-37页 |
| 第二节 硒代NisP蛋白的表达及纯化 | 第37-39页 |
| 第三节 NisP蛋白的晶体筛选及优化 | 第39-43页 |
| ·蛋白质结晶的原理及方法 | 第39-41页 |
| ·NisP蛋白晶体的筛选及优化 | 第41-43页 |
| 第四节 硒代NisP蛋白晶体数据收集及结构解析 | 第43-51页 |
| ·硒代NisP蛋白晶体数据的收集及处理 | 第44页 |
| ·硒代NisP蛋白晶体结构解析 | 第44-51页 |
| ·硒原子位置确定和初始相位的获得 | 第44-45页 |
| ·NisP结构模型的搭建及修正 | 第45-46页 |
| ·NisP蛋白结构模型的评估 | 第46-51页 |
| 第五节 NisP结构分析及特征 | 第51-56页 |
| ·NisP蛋白结构描述 | 第51-53页 |
| ·NisP蛋白的活性中心 | 第53-54页 |
| ·NisP蛋白结构中结合的C末端短肽 | 第54-56页 |
| 第三章 NisP蛋白的C末端自剪切 | 第56-71页 |
| 第一节 NisP蛋白C末端自剪切的酶活实验验证 | 第56-62页 |
| ·NisP活性中心突变体表达载体构建 | 第56-59页 |
| ·NisP活性中心突变体蛋白的表达及纯化 | 第59-60页 |
| ·酶活测定 | 第60-62页 |
| 第二节 NisP蛋白C末端自剪切的Western blot实验验证 | 第62-66页 |
| ·双标签AN-NisP蛋白的构建 | 第62-65页 |
| ·双标签AN-NisP蛋白Western blot实验分析 | 第65-66页 |
| 第三节 NisP蛋白C末端剪切位点确认 | 第66-71页 |
| ·点突变实验验证NisP蛋白自剪切位点 | 第66-68页 |
| ·质谱实验验证NisP蛋白的自剪切位点 | 第68-71页 |
| 第四章 NisP蛋白C末端自剪切意义的探索 | 第71-80页 |
| 第一节 NisP蛋白C末端自剪切对其活性影响的检验 | 第71-77页 |
| ·体外酶活实验检测NisP对其C末端的剪切活性 | 第71-73页 |
| ·抑菌实验检测体外情况下NisP蛋白在nisin成熟中活性 | 第73-74页 |
| ·乳酸乳球菌内检验NisP蛋白在nisin成熟中活性 | 第74-77页 |
| 第二节 NisP蛋白C末端剪切对乳酸乳球菌生长的影响 | 第77-80页 |
| ·乳酸乳球菌生长情况测定 | 第77-78页 |
| ·相同OD_(600)下抑菌情况的测定 | 第78-79页 |
| ·NisP蛋白C末端自剪切可能导致其从细胞表面释放 | 第79-80页 |
| 第五章 NisP底物选择性的讨论 | 第80-86页 |
| 第一节 NisP对nisin前体的识别与切割 | 第80-82页 |
| 第二节 NisP对其他底物的识别与切割 | 第82-86页 |
| ·NisP对其自身N末端序列的识别与切割 | 第82-83页 |
| ·NisP对其自身C末端序列的识别与切割 | 第83-84页 |
| ·NisP底物的比较 | 第84-86页 |
| 第六章 NisP活性对钙离子依赖性的讨论 | 第86-93页 |
| 第一节 NisP蛋白结构中未结合有钙离子 | 第86-91页 |
| 第二节 钙离子对NisP蛋白活性影响测定 | 第91-93页 |
| 第七章 结论 | 第93-95页 |
| 附录A结核分枝杆菌内切核酸酶Ⅳ的结构生物学研究 | 第95-109页 |
| 第一节 研究背景 | 第95-99页 |
| A.1.1 DNA损伤及修复 | 第95-96页 |
| A.1.2 内切核酸酶Ⅳ参与了结核分枝杆菌中DNA损伤修复 | 第96-99页 |
| 第二节 实验过程及结果 | 第99-109页 |
| A.2.1 end基因的克隆与表达载体构建 | 第99页 |
| A.2.2 End蛋白的表达与纯化 | 第99-102页 |
| A.2.3 End蛋白晶体筛选、数据收集及结构解析 | 第102-104页 |
| A.2.4 End蛋白结构描述 | 第104-107页 |
| A.2.5 讨论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第119页 |
