| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略语表 | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| ·β-葡聚糖概述 | 第10-11页 |
| ·葡聚糖酶性质与作用 | 第11-14页 |
| ·葡聚糖酶的分类及来源 | 第11-12页 |
| ·葡聚糖酶的分子结构 | 第12-13页 |
| ·葡聚糖酶的作用机理 | 第13-14页 |
| ·β-葡聚糖酶的酶学性质 | 第14页 |
| ·葡聚糖酶的应用研究 | 第14-16页 |
| ·葡聚糖酶在饲料工业中的应用 | 第14-15页 |
| ·葡聚糖酶在酿酒工业中的应用 | 第15页 |
| ·葡聚糖酶在纺织业中的应用 | 第15-16页 |
| ·葡聚糖酶基因工程研究 | 第16-17页 |
| ·植物葡聚糖酶基因的研究 | 第16页 |
| ·微生物葡聚糖酶基因的研究 | 第16-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第17-20页 |
| ·毕赤酵母表达系统优点 | 第18页 |
| ·影响外源基因在毕赤酵母中表达的因素 | 第18-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第2章 源于F.succinogene的β-葡聚糖酶基因的优化及其在毕赤酵母中的 表达 | 第21-35页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·工具酶 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·部分培养基及溶液的配置 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-27页 |
| ·产琥珀酸丝状杆菌 1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因的优化与合成 | 第22页 |
| ·产琥珀酸丝状杆菌 1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因毕赤酵母工程菌构建 | 第22-23页 |
| ·重组酵母的构建 | 第23-25页 |
| ·重组酵母的筛选 | 第25页 |
| ·重组酵母的鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组酵母摇瓶水平 GLU 和 GLUm 活力比较 | 第26页 |
| ·重组菌株高密度发酵 | 第26-27页 |
| ·比较重组酵母产 GLU 和 GLUm 的菌体质量 | 第27页 |
| ·比较重组酵母产 GLU 和 GLUm 的比活力 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-33页 |
| ·产琥珀酸丝状杆菌 1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因的优化 | 第27-29页 |
| ·重组表达载体酶切验证 | 第29页 |
| ·重组酵母转化及筛选 | 第29-30页 |
| ·重组酵母 PCR 验证 | 第30-31页 |
| ·优化前后基因在摇瓶水平下表达β-葡聚糖酶的活力比较 | 第31页 |
| ·优化前后基因在发酵罐水平下表达β-葡聚糖酶的比较 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第3章 毕赤酵母不同甲醇利用表型 Mut~+和 Muts表达产琥珀酸丝状杆菌β- 葡聚糖酶基因的比较 26 3.1 材料 | 第35-42页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·工具酶 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·培养基及部分溶液的配置 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·重组酵母的构建 | 第35-36页 |
| ·重组酵母的验证 | 第36页 |
| ·重组酵母高密度发酵 | 第36页 |
| ·重组酶活力的比较 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-40页 |
| ·重组酵母筛选 | 第37页 |
| ·Mut~+和 MutS菌株的鉴定 | 第37-38页 |
| ·Mut~+和 MutS菌株表达β-葡聚糖酶活力的鉴定 | 第38页 |
| ·Mut~+和 MutS菌株在发酵罐水平下表达β-葡聚糖酶的比较 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第4章 重组产琥珀酸丝状杆菌β-葡聚糖酶酶学性质的研究 | 第42-48页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·优化基因重组酶 SDS-PAGE | 第42页 |
| ·优化基因重组酶的纯化 | 第42-43页 |
| ·最适温度及最适 pH 值 | 第43页 |
| ·温度的稳定性及 pH 稳定性 | 第43页 |
| ·底物特异性 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第5章 体外评定重组β-葡聚糖酶的作用效果 | 第48-52页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·试验材料 | 第48页 |
| ·试验仪器 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·β-葡聚糖酶酶解时间对还原糖生成量的影响 | 第48页 |
| ·β-葡聚糖酶添加水平对还原糖生成量的影响 | 第48页 |
| ·β-葡聚糖酶对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-51页 |
| ·β-葡聚糖酶酶解时间对还原糖生成量的影响 | 第49页 |
| ·β-葡聚糖酶添加水平对还原糖生成量的影响 | 第49-50页 |
| ·β-葡聚糖酶对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第6章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
