| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一章 红花离体再生体系的建立 | 第16-32页 |
| 一、所用仪器与试剂 | 第16页 |
| (一) 主要实验仪器 | 第16页 |
| (二) 主要试剂 | 第16页 |
| 二、实验材料与方法 | 第16-21页 |
| (一) 供试材料 | 第16-17页 |
| (二) 培养条件 | 第17页 |
| (三) 实验方法 | 第17-21页 |
| 1、所用试剂与激素母液的配制 | 第17-18页 |
| 2、培养基的配制 | 第18页 |
| 3、培养无菌苗 | 第18-19页 |
| 4、获得外植体并进行再生诱导 | 第19-20页 |
| (1) 红花再生芽诱导预实验 | 第19-20页 |
| (2) 红花再生芽诱导培养基配方的优化 | 第20页 |
| 5、红花再生芽伸长 | 第20页 |
| 6、实验记录与结果处理 | 第20-21页 |
| 三、实验结果与分析 | 第21-30页 |
| (一) 培养无菌苗 | 第21-23页 |
| (二) 红花再生芽诱导预实验 | 第23-27页 |
| (三) 红花再生芽诱导培养基配方的优化 | 第27-29页 |
| (四) 红花再生芽的伸长 | 第29-30页 |
| 四、本章小结 | 第30-32页 |
| 第二章 基于RACE技术克隆5条红花F3H候选基因的全长 | 第32-77页 |
| 一、所用仪器与试剂 | 第32-34页 |
| (一) 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| (二) 主要试剂 | 第33页 |
| (三) 常用试剂及培养基的配制 | 第33-34页 |
| 二、实验材料与方法 | 第34-44页 |
| (一) 红花花冠总RNA的提取与检测 | 第34-36页 |
| 1、植物材料 | 第34页 |
| 2、器材准备 | 第34页 |
| 3、提取红花花冠总RNA | 第34-35页 |
| 4、红花花冠总RNA的完整性及纯度检测 | 第35-36页 |
| (1) 完整性检测 | 第35-36页 |
| (2) 纯度检测 | 第36页 |
| (二) 合成cDNA第一链 | 第36页 |
| (三) RACE扩增各Contig的5'和3'端 | 第36-39页 |
| 1、RACE-cDNA文库的构建 | 第36-37页 |
| 2、设计RACE特异性引物 | 第37-38页 |
| 3、进行RACE扩增反应 | 第38-39页 |
| (四) 目的片段的检测回收与测序 | 第39页 |
| (五) 目的片段与T载体连接并转化到大肠杆菌中保存 | 第39-41页 |
| (六) 各基因全长序列的获得及生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 1、各基因全长序列的获得 | 第41页 |
| 2、各基因全长序列的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| (七) 克隆各基因全长 | 第42-44页 |
| 1、设计各基因全长特异性引物 | 第42-43页 |
| 2、进行PCR扩增反应 | 第43-44页 |
| 3、目的片段与T载体连接并转化到大肠杆菌中保存 | 第44页 |
| 三、实验结果与分析 | 第44-75页 |
| (一) 红花花冠总RNA的提取与检测 | 第44-45页 |
| (二) RACE扩增获得各Contig的5'和3'端 | 第45-47页 |
| (三) 各基因全长序列的获得及生物信息学分析 | 第47-74页 |
| 1、Contig897全长序列的获得与分析 | 第47-52页 |
| 2、Contig1988全长序列的获得与分析 | 第52-57页 |
| 3、Contig2129全长序列的获得与分析 | 第57-63页 |
| 4、Contig3482全长序列的获得与分析 | 第63-69页 |
| 5、Contig3855全长序列的获得与分析 | 第69-74页 |
| (四) 各基因全长的克隆 | 第74-75页 |
| 四、本章小结 | 第75-77页 |
| 第三章 目的基因的原核表达初探 | 第77-89页 |
| 一、所用仪器与试剂 | 第77-78页 |
| (一) 主要仪器设备 | 第77页 |
| (二) 主要试剂 | 第77-78页 |
| (三) 常用试剂及培养基的配制 | 第78页 |
| 二、实验材料与方法 | 第78-81页 |
| (一) 扩增目的片段 | 第78-80页 |
| 1、设计目的片段扩增引物 | 第78-79页 |
| 2、进行目的片段的PCR扩增反应 | 第79-80页 |
| 3、目的片段的检测回收、克隆保存及测序 | 第80页 |
| (二) 所得目的片段的序列分析 | 第80页 |
| (三) 构建重组质粒 | 第80页 |
| (四) 将重组质粒转化到BL21(DE3)pLysS宿主菌 | 第80页 |
| (五) 诱导表达 | 第80-81页 |
| 1、诱导准备工作 | 第80-81页 |
| 2、进行诱导表达实验 | 第81页 |
| 3、表达产物分析 | 第81页 |
| 三、实验结果与分析 | 第81-88页 |
| (一) 扩增目的片段 | 第81-82页 |
| (二) 所得目的片段的序列分析 | 第82-85页 |
| 1、P897序列分析 | 第82-84页 |
| 2、P2129序列分析 | 第84-85页 |
| (三) 构建重组质粒 | 第85-86页 |
| (四) 将重组质粒转化到BL21(DE3)pLysS宿主菌 | 第86页 |
| (五) 表达产物分析 | 第86-88页 |
| 四、本章小结 | 第88-89页 |
| 第四章 研究总结 | 第89-92页 |
| 一、红花离体再生体系的建立 | 第89页 |
| 二、基于RACE技术克隆5条红花F3H候选基因的全长 | 第89-90页 |
| 三、目的基因的原核表达初探 | 第90-91页 |
| 四、总结与展望 | 第91-92页 |
| 文献综述 | 第92-107页 |
| 参考文献 | 第101-107页 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
