| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-31页 |
| ·细菌表面展示技术与应用进展 | 第13-17页 |
| ·表面展示技术的简介 | 第13页 |
| ·细菌表面展示体系的组成 | 第13-15页 |
| ·运载蛋白 | 第13-14页 |
| ·靶蛋白 | 第14页 |
| ·宿主菌 | 第14-15页 |
| ·细菌表面展示技术的应用 | 第15-17页 |
| ·疫苗开发 | 第15页 |
| ·多肽文库的筛选 | 第15-16页 |
| ·全细胞催化剂 | 第16页 |
| ·生物吸附剂及降解剂 | 第16-17页 |
| ·表面展示技术的问题及展望 | 第17页 |
| ·细菌自溶素 | 第17-23页 |
| ·自溶素概述 | 第17-18页 |
| ·自溶素分类 | 第18-22页 |
| ·N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸-酰胺酶 | 第19-20页 |
| ·肽链内切酶和羧肽酶 | 第20页 |
| ·N-乙酰胞壁酸 | 第20-22页 |
| ·N-乙酰葡萄糖胺酶 | 第22页 |
| ·细菌生活周期中的自溶素 | 第22-23页 |
| ·LysM模体 | 第23-26页 |
| ·LysM结构域概述 | 第23页 |
| ·LysM的结构 | 第23-24页 |
| ·含有LysM模体的多种功能蛋白 | 第24-25页 |
| ·肽聚糖水解酶 | 第24-25页 |
| ·噬菌体细胞溶解酶 | 第25页 |
| ·其它蛋白 | 第25页 |
| ·LysM模体的发展 | 第25-26页 |
| ·漆酶的研究进展 | 第26-29页 |
| ·漆酶概述 | 第26页 |
| ·漆酶的性质 | 第26-28页 |
| ·漆酶的理化性质 | 第26-27页 |
| ·漆酶的结构及催化活性中心 | 第27页 |
| ·漆酶催化的底物ABTS | 第27-28页 |
| ·漆酶活性的增强与抑制 | 第28页 |
| ·漆酶的应用 | 第28-29页 |
| ·食品行业的应用 | 第28页 |
| ·在工业废水处理中的应用 | 第28-29页 |
| ·在其它方面的应用 | 第29页 |
| ·研究目的及意义 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-41页 |
| ·实验材料 | 第31-36页 |
| ·菌株 | 第31-32页 |
| ·质粒 | 第32-33页 |
| ·PCR引物 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·试剂 | 第34-36页 |
| ·抽提质粒和总DNA、制备感受态 | 第34页 |
| ·酶切、酶连、PCR和DNA回收 | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳、SDS-PAGE及Western blot | 第34-35页 |
| ·显微镜观察及流式细胞仪分析所用试剂 | 第35页 |
| ·SDS及Pronase敏感性分析试剂 | 第35页 |
| ·大肠杆菌表达、纯化所需试剂 | 第35页 |
| ·漆酶活性测定试剂 | 第35-36页 |
| ·其它缓冲液及试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-41页 |
| ·常规分子生物学操作技术 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌和苏云金芽胞杆菌质粒DNA抽提 | 第36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA的抽提 | 第36-37页 |
| ·DNA电泳分析及回收 | 第37页 |
| ·酶连与大肠杆菌的CaCl_2法转化 | 第37页 |
| ·PCR扩增 | 第37页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第37-38页 |
| ·绿色荧光蛋白荧光强度检测 | 第38页 |
| ·生长曲线及荧光活性曲线绘制 | 第38页 |
| ·苏云金芽胞杆菌细胞成分的分级分离 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE及Western Blot分析 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第38页 |
| ·Western blot分析 | 第38-39页 |
| ·相差及荧光显微镜观察 | 第39页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第39页 |
| ·大肠杆菌诱导表达、亲和纯化 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌诱导表达 | 第39页 |
| ·亲和纯化 | 第39-40页 |
| ·漆酶酶活性的测定 | 第40页 |
| ·相对荧光定量 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-61页 |
| ·mbg基因表达分析 | 第41-43页 |
| ·mbg在苏云金芽胞杆菌不同菌种中的扩增 | 第41-42页 |
| ·mbg坛基因在细菌不同生长时期的转录活性 | 第42-43页 |
| ·Mbgn-GFP表面展示体系构建及分析 | 第43-47页 |
| ·Mbgn-GFP表面展示体系构建 | 第43页 |
| ·生长曲线及荧光强度曲线绘制 | 第43-45页 |
| ·荧光显微镜及免疫荧光显微镜观察 | 第45-46页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第46-47页 |
| ·Mbgn-GFP融合蛋白的纯化与体外锚定 | 第47-51页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第47-49页 |
| ·Mbgn-GFP对不同菌株的体外锚定能力分析 | 第49-51页 |
| ·Mbgn-WlacD表而展示体系构建 | 第51-55页 |
| ·Mbgn-WlacD表面展示体系构建 | 第51页 |
| ·重组菌漆酶活性测定 | 第51-52页 |
| ·生长曲线及酶活曲线的绘制 | 第52-54页 |
| ·免疫荧光显微镜观察 | 第54页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第54-55页 |
| ·Mbgn-WlacD融合蛋白的表达 | 第55-58页 |
| ·融合蛋白表达载体的构建与诱导 | 第55-57页 |
| ·融合蛋白体外锚定能力分析 | 第57-58页 |
| ·Mbg蛋白的纯化 | 第58-61页 |
| ·Mbg纯化载体的构建 | 第58-59页 |
| ·Mbg蛋白的诱导 | 第59-61页 |
| 4. 讨论 | 第61-66页 |
| ·Mbg的功能分析 | 第61-62页 |
| ·Mbg的锚定能力分析 | 第62-64页 |
| ·小结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74页 |