摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-16页 |
第一章 绪论 | 第16-34页 |
·苏云金芽胞杆菌 | 第16页 |
·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的结构及功能 | 第16-19页 |
·不同苏云金芽胞杆菌毒素蛋白结构的比较 | 第16-17页 |
·DomainⅠ | 第17-18页 |
·DomainⅡ | 第18页 |
·Domain Ⅲ | 第18-19页 |
·Cry 毒素与昆虫作用的机制 | 第19-22页 |
·Bravo 模型 | 第19-20页 |
·Zhang 模型 | 第20-21页 |
·Jurat-Fuentes 模型 | 第21-22页 |
·苏云金芽胞杆菌毒素蛋白杀虫特异性 | 第22-28页 |
·鳞翅目昆虫 | 第22-26页 |
·双翅目昆虫 | 第26-27页 |
·鞘翅目昆虫 | 第27-28页 |
·杀虫晶体蛋白的分子设计 | 第28-31页 |
·Domain I 的突变 | 第28-29页 |
·Domain II 的突变 | 第29-30页 |
·Domain III 的突变 | 第30-31页 |
·结构域互换 | 第31页 |
·苏云金芽胞杆菌 Cry 毒素进化 | 第31-32页 |
·Cry1Ba 蛋白 | 第32-33页 |
·本研究的立题依据、研究内容和目的意义 | 第33-34页 |
·立题依据 | 第33页 |
·研究内容 | 第33页 |
·目的意义 | 第33-34页 |
第二章 材料与方法 | 第34-48页 |
·实验材料 | 第34-38页 |
·实验所用菌株和质粒 | 第34-35页 |
·培养基 | 第35-36页 |
·抗生素 | 第36页 |
·SDS-PAGE 试剂 | 第36页 |
·标准分子量 | 第36页 |
·大肠杆菌蛋白诱导表达及提取试剂 | 第36页 |
·亚洲玉米螟 BBMV 提取试剂 | 第36-37页 |
·Cry1Ac 蛋白提取试剂 | 第37页 |
·Western blotting 试剂 | 第37页 |
·本研究所用酶与生化试剂 | 第37页 |
·供试昆虫 | 第37-38页 |
·仪器设备 | 第38页 |
·实验方法 | 第38-48页 |
·生物信息学分析 | 第38-42页 |
·引物设计 | 第42-44页 |
·E. coli 质粒提取 | 第44-45页 |
·突变体质粒的构建 | 第45页 |
·大肠杆菌 BL21 感受态细胞制备 | 第45页 |
·Cry1Ba3 及突变体蛋白的诱导表达与提取 | 第45页 |
·镍亲和层析纯化 Cry1Ba3 | 第45-46页 |
·小菜蛾(Plutella xylostella)生物活性测定 | 第46页 |
·大猿叶甲(Colaphellus bowringi)生物活性测定 | 第46页 |
·韭蛆(Bradysia odoriphaga)的生物活性测定 | 第46页 |
·亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)的生物活性测定 | 第46页 |
·Bt 蛋白的提取方法 | 第46页 |
·生物素标记 | 第46-47页 |
·亚洲玉米螟中肠 BBMV 的提取 | 第47页 |
·毒素与昆虫 BBMV 的体外结合分析——生物素标记法 | 第47-48页 |
第三章 结果与分析 | 第48-77页 |
·生物信息学分析 | 第48-50页 |
·Cry1Ba3 蛋白三维结构 | 第48页 |
·Cry1Ba3 蛋白选择压力分析 | 第48-50页 |
·突变质粒的构建 | 第50-52页 |
·突变蛋白的诱导表达和 SDS-PAGE 检测 | 第52-53页 |
·突变体蛋白对试虫的生物活性测定 | 第53-65页 |
·突变体活性初步筛选 | 第53-56页 |
·对小菜蛾生物活性初筛 | 第53-54页 |
·对大猿叶甲生物活性初筛: | 第54-55页 |
·对韭蛆生物活性初步测定 | 第55-56页 |
·突变体蛋白对两种试虫生物活性的测定 | 第56-63页 |
·突变体蛋白对小菜蛾生物活性的测定 | 第56-59页 |
·突变体蛋白对大猿叶甲生物活性的测定 | 第59-63页 |
·突变体对小菜蛾的复筛 | 第63-65页 |
·Cry1Ba3 蛋白的纯化 | 第65-67页 |
·Cry1Ac 蛋白的提取、活化和纯化 | 第67-69页 |
·纯化蛋白对亚洲玉米螟生物活性的测定 | 第69-70页 |
·亚洲玉米螟 BBMV 的提取及定量 | 第70-71页 |
·竞争结合实验 | 第71-72页 |
·讨论 | 第72-77页 |
·Cry1Ba3 对小菜蛾及大猿叶甲活性相关位点的确定 | 第72-75页 |
·Cry1Ba 蛋白对亚洲玉米螟的生物学活性以及与 Cry1Ac 对玉米螟中肠 BBMV 的竞争结合分析 | 第75-77页 |
第四章 全文主要结论 | 第77-78页 |
参考文献 | 第78-88页 |
致谢 | 第88-89页 |
作者简历 | 第89-90页 |
附录 | 第90-94页 |