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苏云金芽胞杆菌Cry1Ba3蛋白杀虫特异性相关区域的研究

摘要第1-7页
Abstract第7-16页
第一章 绪论第16-34页
   ·苏云金芽胞杆菌第16页
   ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的结构及功能第16-19页
     ·不同苏云金芽胞杆菌毒素蛋白结构的比较第16-17页
     ·DomainⅠ第17-18页
     ·DomainⅡ第18页
     ·Domain Ⅲ第18-19页
   ·Cry 毒素与昆虫作用的机制第19-22页
     ·Bravo 模型第19-20页
     ·Zhang 模型第20-21页
     ·Jurat-Fuentes 模型第21-22页
   ·苏云金芽胞杆菌毒素蛋白杀虫特异性第22-28页
     ·鳞翅目昆虫第22-26页
     ·双翅目昆虫第26-27页
     ·鞘翅目昆虫第27-28页
   ·杀虫晶体蛋白的分子设计第28-31页
     ·Domain I 的突变第28-29页
     ·Domain II 的突变第29-30页
     ·Domain III 的突变第30-31页
     ·结构域互换第31页
   ·苏云金芽胞杆菌 Cry 毒素进化第31-32页
   ·Cry1Ba 蛋白第32-33页
   ·本研究的立题依据、研究内容和目的意义第33-34页
     ·立题依据第33页
     ·研究内容第33页
     ·目的意义第33-34页
第二章 材料与方法第34-48页
   ·实验材料第34-38页
     ·实验所用菌株和质粒第34-35页
     ·培养基第35-36页
     ·抗生素第36页
     ·SDS-PAGE 试剂第36页
     ·标准分子量第36页
     ·大肠杆菌蛋白诱导表达及提取试剂第36页
     ·亚洲玉米螟 BBMV 提取试剂第36-37页
     ·Cry1Ac 蛋白提取试剂第37页
     ·Western blotting 试剂第37页
     ·本研究所用酶与生化试剂第37页
     ·供试昆虫第37-38页
     ·仪器设备第38页
   ·实验方法第38-48页
     ·生物信息学分析第38-42页
     ·引物设计第42-44页
     ·E. coli 质粒提取第44-45页
     ·突变体质粒的构建第45页
     ·大肠杆菌 BL21 感受态细胞制备第45页
     ·Cry1Ba3 及突变体蛋白的诱导表达与提取第45页
     ·镍亲和层析纯化 Cry1Ba3第45-46页
     ·小菜蛾(Plutella xylostella)生物活性测定第46页
     ·大猿叶甲(Colaphellus bowringi)生物活性测定第46页
     ·韭蛆(Bradysia odoriphaga)的生物活性测定第46页
     ·亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)的生物活性测定第46页
     ·Bt 蛋白的提取方法第46页
     ·生物素标记第46-47页
     ·亚洲玉米螟中肠 BBMV 的提取第47页
     ·毒素与昆虫 BBMV 的体外结合分析——生物素标记法第47-48页
第三章 结果与分析第48-77页
   ·生物信息学分析第48-50页
     ·Cry1Ba3 蛋白三维结构第48页
     ·Cry1Ba3 蛋白选择压力分析第48-50页
   ·突变质粒的构建第50-52页
   ·突变蛋白的诱导表达和 SDS-PAGE 检测第52-53页
   ·突变体蛋白对试虫的生物活性测定第53-65页
       ·突变体活性初步筛选第53-56页
       ·对小菜蛾生物活性初筛第53-54页
       ·对大猿叶甲生物活性初筛:第54-55页
       ·对韭蛆生物活性初步测定第55-56页
     ·突变体蛋白对两种试虫生物活性的测定第56-63页
       ·突变体蛋白对小菜蛾生物活性的测定第56-59页
       ·突变体蛋白对大猿叶甲生物活性的测定第59-63页
     ·突变体对小菜蛾的复筛第63-65页
   ·Cry1Ba3 蛋白的纯化第65-67页
   ·Cry1Ac 蛋白的提取、活化和纯化第67-69页
   ·纯化蛋白对亚洲玉米螟生物活性的测定第69-70页
   ·亚洲玉米螟 BBMV 的提取及定量第70-71页
   ·竞争结合实验第71-72页
   ·讨论第72-77页
     ·Cry1Ba3 对小菜蛾及大猿叶甲活性相关位点的确定第72-75页
     ·Cry1Ba 蛋白对亚洲玉米螟的生物学活性以及与 Cry1Ac 对玉米螟中肠 BBMV 的竞争结合分析第75-77页
第四章 全文主要结论第77-78页
参考文献第78-88页
致谢第88-89页
作者简历第89-90页
附录第90-94页

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