| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1 MSTN的功能与调控 | 第16-23页 |
| ·MSTN与转录 | 第16页 |
| ·MSTN与突变 | 第16-18页 |
| ·MSTN与前体蛋白 | 第18-19页 |
| ·MSTN与调控蛋白 | 第19-21页 |
| ·Furin | 第19页 |
| ·LAP | 第19-20页 |
| ·FST | 第20页 |
| ·其他调控蛋白 | 第20-21页 |
| ·MSTN与信号通路 | 第21-23页 |
| 2 MSTN基因的表达研究 | 第23-28页 |
| ·MSTN基因的组织表达谱 | 第23-26页 |
| ·哺乳动物MSTN基因的组织表达谱 | 第23-24页 |
| ·鱼类MSTN基因的组织表达谱 | 第24-25页 |
| ·禽类MSTN基因的组织表达谱 | 第25-26页 |
| ·MSTN基因的发育表达谱 | 第26-28页 |
| ·哺乳动物MSTN基因的发育表达谱 | 第26-27页 |
| ·鱼类MSTN基因的发育表达谱 | 第27-28页 |
| ·禽类MSTN基因的发育表达谱 | 第28页 |
| 3 基因选择性剪接 | 第28-34页 |
| ·选择性剪接的生物学功能 | 第28-29页 |
| ·选择性剪接方式 | 第29-30页 |
| ·选择性剪接调控机制 | 第30-34页 |
| ·剪接位点及其结合蛋白 | 第30-32页 |
| ·顺式作用元件与反式作用因子 | 第32-34页 |
| ·外显子-内含子长度 | 第34页 |
| ·剪接变异体的NMD途径 | 第34页 |
| 4 本实验的目的意义 | 第34-35页 |
| 5 本研究的技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 鸭MSTN基因剪切体克隆及剪切模式分析 | 第36-58页 |
| 1 前言 | 第36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-46页 |
| ·试验材料 | 第36-38页 |
| ·试验动物 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36-38页 |
| ·主要试剂盒与试剂 | 第38页 |
| ·总RNA提取及质量检测 | 第38-39页 |
| ·总RNA提取 | 第38-39页 |
| ·总RNA质量检测 | 第39页 |
| ·基因组DNA提取及质量检测 | 第39-40页 |
| ·基因组DNA提取 | 第39-40页 |
| ·基因组DNA质量检测 | 第40页 |
| ·RNA反转录 | 第40-42页 |
| ·普通反转录 | 第40-41页 |
| ·合成5’和3’RACE cDNA | 第41-42页 |
| ·引物设计、合成 | 第42-43页 |
| ·MSTN基因序列扩增 | 第43-45页 |
| ·MSTN基因部分剪切体RT-PCR法扩增 | 第43页 |
| ·MSTN基因5’和3’RACE扩增 | 第43-44页 |
| ·MSTN基因内含子1扩增 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR产物回收和克隆测序 | 第45-46页 |
| ·胶回收 | 第45页 |
| ·连接、克隆 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆测序 | 第46页 |
| ·试验数据分析 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-54页 |
| ·总RNA和基因组DNA提取效果 | 第46-47页 |
| ·鸭MSTN基因基因组序列 | 第47页 |
| ·鸭MSTN mRNA序列 | 第47-48页 |
| ·鸭MSTN基因mRNA部分序列RT-PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·鸭MSTN基因5’及3’RACE扩增 | 第48页 |
| ·序列拼接 | 第48页 |
| ·MSTN基因剪切模式分析 | 第48-50页 |
| ·剪切位点调控 | 第50-52页 |
| ·剪切体保守结构域、功能元件分析 | 第52-53页 |
| ·剪切体NMD分析 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| ·鸭MSTN序列的获取 | 第54页 |
| ·鸭MSTN基因可变剪切及结构域变化 | 第54-55页 |
| ·鸭MSTN基因选择性剪切顺式调控元件 | 第55-56页 |
| ·提前终止与NMD | 第56-57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 第三章 MSTN基因剪切体组织表达及功能分化分析 | 第58-75页 |
| 1 前言 | 第58页 |
| 2 材料与方法 | 第58-63页 |
| ·试验材料 | 第58-60页 |
| ·试验样品 | 第58-59页 |
| ·主要试剂盒与试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器设备 | 第59-60页 |
| ·荧光引物设计及合成 | 第60页 |
| ·各组织RNA提取及质量检测 | 第60-61页 |
| ·反转录PCR | 第61页 |
| ·荧光定量PCR | 第61-62页 |
| ·标准品(质粒)的制备 | 第61页 |
| ·荧光定量PCR | 第61-62页 |
| ·生物信息分析 | 第62-63页 |
| ·多物种MSTN序列下载 | 第62页 |
| ·序列比对及进化分析 | 第62-63页 |
| ·密码子偏好性分析 | 第63页 |
| ·替代率分析 | 第63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-71页 |
| ·鸭MSTN基因组织表达差异 | 第63-67页 |
| ·鸭MSTN-a组织差异分析 | 第63-64页 |
| ·鸭MSTN-b组织差异分析 | 第64-65页 |
| ·鸭MSTN-c组织差异分析 | 第65-66页 |
| ·鸭MSTN-d组织差异表达 | 第66-67页 |
| ·序列下载及相似性比对 | 第67-68页 |
| ·MSTN基因进化树分析 | 第68-69页 |
| ·密码子偏好性分析 | 第69-71页 |
| ·替代率分析 | 第71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| ·MSTN基因组织差异表达 | 第71-73页 |
| ·MSTN基因功能分化 | 第73-74页 |
| 5 小结 | 第74-75页 |
| 第四章 MSTN基因在胚胎期胸肌、腿肌、心脏中的发育表达 | 第75-88页 |
| 1 前言 | 第75页 |
| 2 材料与方法 | 第75-78页 |
| ·试验材料 | 第75-77页 |
| ·试验样品 | 第75-76页 |
| ·主要试剂盒与试剂 | 第76页 |
| ·主要仪器设备 | 第76-77页 |
| ·试验方法 | 第77-78页 |
| ·荧光定量引物设计及合成 | 第77页 |
| ·各组织总RNA提取 | 第77页 |
| ·总RNA质量检测 | 第77页 |
| ·反转录PCR | 第77页 |
| ·荧光定量PCR | 第77-78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-84页 |
| ·鸭MSTN基因4种剪切体在胸肌发育中的表达 | 第78-79页 |
| ·鸭MSTN基因4种剪切体在腿肌发育中的表达 | 第79-80页 |
| ·鸭MSTN基因4种剪切体在心脏发育中的表达 | 第80-82页 |
| ·鸭MRFs家族基因在心脏发育中的表达 | 第82-84页 |
| ·心脏发育中MSTN基因与MRFs家族基因表达的关系 | 第84页 |
| 4 讨论 | 第84-87页 |
| ·鸭MSTN基因4种剪切体在胸肌和腿肌中的发育表达差异 | 第84-85页 |
| ·鸭MSTN基因4种剪切体在不同肌纤维类型中的发育表达差异 | 第85-86页 |
| ·鸭MSTN基因在心肌组织中的发育表达差异 | 第86-87页 |
| ·鸭MSTN各剪切体在心肌组织中的发育表达差异 | 第86页 |
| ·鸭MSTN在心肌中的发育表达及与MRFs基因家族之间的关系 | 第86-87页 |
| ·MSTN基因调控心肌发育可能的分子机制 | 第87页 |
| 5 小结 | 第87-88页 |
| 第五章 鸭MSTN基因剪切体对下游基因表达的影响 | 第88-108页 |
| 1 前言 | 第88页 |
| 2 材料与方法 | 第88-98页 |
| ·试验材料 | 第88-91页 |
| ·试验样品 | 第88-89页 |
| ·主要试剂盒与试剂 | 第89页 |
| ·主要仪器设备 | 第89-91页 |
| ·试验方法 | 第91-98页 |
| ·鸭MSTN-a和MSTN-b的转染引物的设计 | 第91页 |
| ·鸭MSTN-a和MSTN-b转染载体构建 | 第91页 |
| ·鸭MSTN-a和MSTN-b的转染 | 第91-94页 |
| ·荧光定量引物设计及合成 | 第94-95页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第95-96页 |
| ·总RNA质量检测 | 第96页 |
| ·反转录PCR | 第96页 |
| ·荧光定量PCR | 第96页 |
| ·成肌细胞培养 | 第96-98页 |
| 3 结果与分析 | 第98-105页 |
| ·转染结果鉴定 | 第98-100页 |
| ·绿色荧光蛋白表达鉴定 | 第98页 |
| ·鸭MSTN-a和MSTN-b荧光定量检测 | 第98-100页 |
| ·鸭MSTN剪切体间相互影响 | 第100-102页 |
| ·MSTN-a对MSTN-b的影响 | 第100-101页 |
| ·MSTN-b对MSTN-a的影响 | 第101-102页 |
| ·MSTN基因转染对MyoD基因的影响 | 第102-103页 |
| ·MSTN基因转染对MyoG基因的影响 | 第103-104页 |
| ·MSTN基因转染对Akirin2基因的影响 | 第104-105页 |
| 4 讨论 | 第105-107页 |
| ·转染成功率 | 第105页 |
| ·鸭MSTN-a与MSTN-b相互之间的影响 | 第105页 |
| ·鸭MSTN剪切体调控MRFs家族基因表达 | 第105-106页 |
| ·鸭MSTN基因与Akirin2基因 | 第106-107页 |
| 5 小结 | 第107-108页 |
| 第六章 总结 | 第108-110页 |
| 1. 本研究的主要结果 | 第108页 |
| 2. 结论 | 第108-109页 |
| 3. 本研究的创新之处 | 第109页 |
| 4. 还需要完善和解决的问题 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 附录 1 进化分析中所用到的序列表 | 第125-126页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第126页 |
