| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 英文缩写词说明 | 第6-10页 |
| 第一部分 前言 | 第10-17页 |
| ·研究背景 | 第10-16页 |
| ·雌激素 | 第10页 |
| ·雌激素受体分类及结构域 | 第10-11页 |
| ·ER的转录调控机制 | 第11-12页 |
| ·ER共调节因子 | 第12-13页 |
| ·乳腺癌的治疗 | 第13页 |
| ·核心组蛋白修饰 | 第13-16页 |
| ·研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二部分 GA9在乳腺癌组织细胞中的表达情况 | 第17-24页 |
| ·实验材料及仪器 | 第17-19页 |
| ·细胞株及乳腺癌组织标本切片 | 第17页 |
| ·细胞培养试剂 | 第17页 |
| ·抗体 | 第17页 |
| ·其它分子生物学试剂和化学试剂 | 第17页 |
| ·主要实验仪器及试剂盒 | 第17-18页 |
| ·主要工作液配方 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-21页 |
| ·细胞培养 | 第19-20页 |
| ·Western blot分析 | 第20页 |
| ·细胞免疫荧光 | 第20页 |
| ·组织免疫 | 第20-21页 |
| ·实验结果 | 第21-23页 |
| ·GA9在乳腺癌细胞系中的表达情况 | 第21-22页 |
| ·细胞内源GA9在乳腺癌细胞中的定位 | 第22页 |
| ·GA9在乳腺癌患者组织中的表达 | 第22-23页 |
| ·讨论 | 第23-24页 |
| 第三部分 GA9与ER的相互作用及其对ER活性的调节作用 | 第24-43页 |
| ·实验材料及仪器 | 第24-27页 |
| ·引物合成及序列测定 | 第24页 |
| ·菌株和细胞系 | 第24页 |
| ·质粒 | 第24页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第24页 |
| ·常用试剂盒 | 第24-25页 |
| ·细胞培养试剂 | 第25页 |
| ·抗体 | 第25页 |
| ·其他试剂 | 第25页 |
| ·主要实验仪器 | 第25页 |
| ·主要工作液配方 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第27-29页 |
| ·siRNAs表达载体的构建 | 第29页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第29-30页 |
| ·Western blot分析(同前) | 第30页 |
| ·GST融合蛋白在大肠杆菌DH5α中的表达鉴定 | 第30页 |
| ·GST融合蛋白的纯化 | 第30页 |
| ·GST沉淀(pull down)分析 | 第30页 |
| ·免疫共沉淀 | 第30-31页 |
| ·荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性测定 | 第31页 |
| ·转录激活活性检测 | 第31-32页 |
| ·RNA的提取 | 第32页 |
| ·实时定量PCR(Real-time PCR) | 第32页 |
| ·实验结果 | 第32-41页 |
| ·GST-GA9八个缺失突变体的表达鉴定 | 第32页 |
| ·GST-pull down实验验证GA9与ERα和ERβ存在体外相互作用 | 第32-33页 |
| ·GST-pull down实验确定GA9与ERα体外相互作用的区域 | 第33页 |
| ·免疫共沉淀实验验证GA9与ERα和ERβ在体内的相互作用 | 第33-34页 |
| ·雌激素(E2)对GA9与ERα和ERβ在体内相互作用的影响 | 第34页 |
| ·与GA9相互作用的ERα和ERβ区域的定位 | 第34-35页 |
| ·内源性免疫共沉淀实验验证GA9与ERα在体内的相互作用 | 第35-36页 |
| ·过表达GA9能抑制ER的转录活性 | 第36-37页 |
| ·GA9对ER转录活性的抑制存在剂量效应 | 第37页 |
| ·过表达GA9能抑制ERα或ERβ的转录活性 | 第37-38页 |
| ·GA9降低ERE报告基因的活性依赖于ERα | 第38-39页 |
| ·GA9 siRNAs的表达鉴定 | 第39页 |
| ·敲低GA9升高ER的转录活性 | 第39-40页 |
| ·GA9对ER下游基因表达的影响 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四部分 GA9与核心组蛋白修饰 | 第43-47页 |
| ·实验材料及仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-45页 |
| ·核心组蛋白原核载体和真核载体的表达鉴定 | 第43-44页 |
| ·GST-pull down实验确定GA9与核心组蛋白在体外结合 | 第44页 |
| ·甲基化分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五部分 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 在校期间研究成果及发表学术论文 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
