| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-33页 |
| ·细胞的膜泡运输 | 第12-17页 |
| ·膜泡运输的特点和方式 | 第12-15页 |
| ·受体介导的胞吞作用 | 第15-17页 |
| ·志贺毒素及其胞内运输 | 第17-27页 |
| ·志贺毒素的结构 | 第18-20页 |
| ·志贺毒素受体——糖鞘脂 Globotriaosylceramide | 第20-21页 |
| ·志贺毒素的胞内运输 | 第21-25页 |
| ·其他毒素蛋白的胞内运输 | 第25-27页 |
| ·半乳凝素-3 概述 | 第27-31页 |
| ·Gal-3 的结构特征 | 第27-28页 |
| ·Gal-3 的生物学活性 | 第28页 |
| ·Gal-3 膜泡运输研究现状 | 第28-31页 |
| ·选题依据、目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 志贺毒素 B 亚基的运输与蛋白溶度及培养条件的关系 | 第33-62页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与仪器 | 第33-36页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·细胞 | 第33页 |
| ·抗体 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·仪器设备 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-47页 |
| ·STxB 系列蛋白的表达 | 第36页 |
| ·STxB 系列蛋白的提取 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白的初步分离纯化及检测 | 第37页 |
| ·HPLC 法纯化目的蛋白 | 第37-39页 |
| ·TCA 沉淀法浓缩蛋白质 | 第39页 |
| ·考马斯亮蓝法蛋白质定量 | 第39-40页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40-41页 |
| ·Western Blot 分析 | 第41-42页 |
| ·蛋白的荧光标记 | 第42-43页 |
| ·细胞培养 | 第43页 |
| ·免疫荧光分析 | 第43-44页 |
| ·本章所用试剂配制 | 第44-47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-60页 |
| ·测序结果 | 第47-49页 |
| ·STxB 系列蛋白的提取 | 第49-50页 |
| ·STxB 系列蛋白的纯化 | 第50-53页 |
| ·STxB 系列蛋白的检测及鉴定 | 第53-54页 |
| ·STxB 系列蛋白质的定量 | 第54页 |
| ·培养条件与 STxB 转运的关系 | 第54-57页 |
| ·STxB 作用浓度对其转运的影响 | 第57-60页 |
| ·本章小结 | 第60-62页 |
| 第三章 STxB 的 C-末端对其转运的影响 | 第62-105页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·材料与仪器 | 第62-64页 |
| ·质粒 | 第62-63页 |
| ·菌株 | 第63页 |
| ·细胞 | 第63页 |
| ·抗体 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63-64页 |
| ·仪器设备 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-76页 |
| ·引物的设计与合成 | 第64-65页 |
| ·目的基因的扩增 | 第65页 |
| ·扩增产物的鉴定及回收 | 第65-66页 |
| ·PCR 产物的双酶切和脱盐浓缩 | 第66页 |
| ·连接载体的酶切和去磷酸化处理 | 第66-67页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第67页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第67页 |
| ·重组菌阳性克隆的鉴定及序列测定 | 第67-68页 |
| ·STxB 的 C-端修饰系列蛋白的表达 | 第68-69页 |
| ·STxB 的 C-端修饰系列蛋白的提取 | 第69页 |
| ·目的蛋白的初步分离纯化及检测 | 第69页 |
| ·C-端修饰系列蛋白的 HPLC 纯化 | 第69页 |
| ·C-末端修饰系列蛋白的检测 | 第69页 |
| ·STxB 及修饰后蛋白的荧光标记 | 第69-70页 |
| ·细胞培养 | 第70页 |
| ·免疫荧光分析 | 第70-71页 |
| ·本章所用试剂配制 | 第71-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-103页 |
| ·引物的设计与合成 | 第76-79页 |
| ·PCR 产物的鉴定 | 第79-80页 |
| ·酶切鉴定 | 第80-81页 |
| ·C-端修饰系列融合蛋白表达质粒测序 | 第81-90页 |
| ·C-端修饰蛋白的表达和提取 | 第90-91页 |
| ·考马斯亮蓝法定量蛋白质 | 第91页 |
| ·蛋白质的荧光标记 | 第91页 |
| ·C-端 Myc 修饰对于转运的影响 | 第91-100页 |
| ·C-端酸碱性氨基酸修饰对转运的影响 | 第100-103页 |
| ·本章小结 | 第103-105页 |
| 第四章 半乳凝素-3 的胞内运输及与 STxB 运输的比较 | 第105-124页 |
| ·引言 | 第105页 |
| ·材料与试剂 | 第105-107页 |
| ·菌株 | 第105页 |
| ·细胞 | 第105-106页 |
| ·抗体 | 第106页 |
| ·主要试剂 | 第106-107页 |
| ·仪器设备 | 第107页 |
| ·方法 | 第107-112页 |
| ·Gal-3 的表达 | 第107页 |
| ·Gal-3 的提取 | 第107-108页 |
| ·Asialofetuin-Sepharose 4B 凝胶的制备 | 第108页 |
| ·Gal-3 的分离 | 第108页 |
| ·SDS-PAGE 检测 Gal-3 纯度 | 第108页 |
| ·Western Blot 检测 | 第108-109页 |
| ·考马斯亮蓝法蛋白质定量 | 第109页 |
| ·蛋白的荧光标记 | 第109页 |
| ·蛋白的生物素标记 | 第109-110页 |
| ·细胞培养 | 第110页 |
| ·免疫荧光检测 | 第110页 |
| ·乳糖抑制实验 | 第110-111页 |
| ·荧光素 Cy3 标记 Transferrin | 第111页 |
| ·Gal-3 向细胞外释放实验 | 第111页 |
| ·本章所用试剂及其的配制 | 第111-112页 |
| ·结果与讨论 | 第112-123页 |
| ·Gal-3 的制备 | 第112-113页 |
| ·电泳检测 Gal-3 结果 | 第113页 |
| ·Western blot 检测 Gal-3 结果 | 第113-114页 |
| ·考马斯亮蓝法蛋白质定量 | 第114页 |
| ·荧光标记后各蛋白级分的检测 | 第114页 |
| ·Gal-3 与 HUVEC 细胞结合 | 第114-115页 |
| ·Gal-3 与细胞的结合是糖基特异性的 | 第115-117页 |
| ·Gal-3 与细胞结合后可发生内化进入到细胞内 | 第117页 |
| ·Gal-3 沿着 EE-RE-LE 途径的胞内运输 | 第117-118页 |
| ·一部分 Gal-3 被重新释放到细胞外 | 第118-120页 |
| ·其他细胞中 Gal-3 的运输 | 第120-121页 |
| ·STxB 与 Gal-3 的转运比较 | 第121-123页 |
| ·本章小结 | 第123-124页 |
| 总结 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-133页 |
| 英文缩写词表 | 第133-135页 |
| 在读期间发表论文 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
