| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| ·镉中毒与肝细胞凋亡 | 第11-12页 |
| ·细胞凋亡与内质网应激 | 第12-14页 |
| ·内质网应激 | 第12-13页 |
| ·内质网应激性凋亡途径 | 第13-14页 |
| ·内质网应激诱导细胞凋亡途径的调控 | 第14-16页 |
| ·Bcl-2蛋白家族在内质网凋亡途径中的调控作用 | 第15页 |
| ·GRPs在内质网凋亡途径中的调控作用 | 第15-16页 |
| ·实验研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-27页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第17-19页 |
| ·主要的菌株与载体 | 第17页 |
| ·主要试剂及配制 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·鸡GRP78基因的克隆、原核表达和多克隆抗体的制备 | 第20-23页 |
| ·鸡GRP78基因的克隆与鉴定 | 第20-21页 |
| ·鸡GRP78重组表达载体的构建与鉴定 | 第21页 |
| ·鸡GRP78基因在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定 | 第21-22页 |
| ·抗GRP78多克隆抗体的制备和鉴定 | 第22-23页 |
| ·鸡肝细胞分离、培养及鉴定 | 第23-24页 |
| ·鸡肝细胞的制备和处理 | 第23-24页 |
| ·鸡肝细胞鉴定 | 第24页 |
| ·检测项目与方法 | 第24-26页 |
| ·镉致鸡肝细胞半数抑制浓度(IC_(50))的测定 | 第24页 |
| ·镉致鸡肝细胞凋亡的检测 | 第24页 |
| ·镉致鸡肝细胞内[Ca~(2+)]i浓度影响的检测 | 第24-25页 |
| ·镉作用鸡肝细胞后Bak、Bcl-2、CaM、Caspase-3、GRP78及GRP94mRNA表达的检测 | 第25-26页 |
| ·镉致鸡肝细胞内GRP78蛋白表达的检测 | 第26页 |
| ·实验数据分析与统计 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-44页 |
| ·鸡GRP78基因的克隆、原核表达、多克隆抗体的制备 | 第27-32页 |
| ·鸡肝脏组织中总RNA的提取与鉴定 | 第27页 |
| ·鸡GRP78基因的PCR扩增结果 | 第27-28页 |
| ·鸡GRP78 mRNA序列的测序结果 | 第28页 |
| ·重组表达载体的构建与鉴定 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白的表达、鉴定与纯化 | 第29-31页 |
| ·多克隆抗体的制备和鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·鸡原代肝细胞体外培养及鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·镉对鸡肝细胞活性的影响及IC_(50)的检测结果 | 第33-34页 |
| ·镉致鸡肝细胞凋亡的检测 | 第34-36页 |
| ·荧光显微镜观察吖啶橙-溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色 | 第34-36页 |
| ·DNA Ladder检测结果 | 第36页 |
| ·镉致鸡肝细胞内[Ca~(2+)]i影响的检测结果 | 第36-37页 |
| ·实时定量PCR检测结果 | 第37-42页 |
| ·鸡原代肝细胞胞浆内GRP78蛋白表达检测结果 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-50页 |
| ·GRP78蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第44页 |
| ·鸡原代肝细胞体外分离、培养及鉴定 | 第44-45页 |
| ·镉对鸡肝细胞半数抑制浓度(IC_(50))的测定 | 第45页 |
| ·镉对鸡肝细胞凋亡的检测 | 第45-46页 |
| ·镉对鸡肝细胞凋亡形态学变化 | 第45-46页 |
| ·镉对鸡肝细胞DNA损伤的影响 | 第46页 |
| ·镉对鸡肝细胞内[Ca~(2+)]i及CaM mRNA表达的影响 | 第46-47页 |
| ·镉对鸡肝细胞Caspase-3,Bcl-2和Bak mRNA表达的影响 | 第47-48页 |
| ·镉对鸡肝细胞GRP94mRNA及GRP78mRNA和蛋白表达影响 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第59页 |
