| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-25页 |
| ·RUNX3 基因以及产物蛋白的结构的重要特点 | 第9-12页 |
| ·RUNX3 基因对肿瘤抑制起到作用 | 第12-22页 |
| ·Runx3 对胃癌的影响 | 第14-18页 |
| ·Runx3 与肺癌 | 第18-19页 |
| ·Runx3 与肝细胞癌 | 第19-20页 |
| ·Runx3 与胆管癌和胰腺癌 | 第20页 |
| ·Runx3 与乳腺癌 | 第20页 |
| ·Runx3 与其他恶性肿瘤 | 第20-22页 |
| ·Runx3 在机体免疫细胞发育过程中的作用 | 第22-25页 |
| ·Runx3 在胸腺细胞发育过程中的作用 | 第22-24页 |
| ·Runx3 与 B 细胞的关系 | 第24-25页 |
| 第二章 抑癌基因 Runx3 蛋白不同免疫方法制备抗体 | 第25-42页 |
| ·Runx3 目的基因片段的获得及表达载体构建 | 第25-30页 |
| ·基因分析获得目的片段序列 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·反转录 PCR 制备小鼠 cDNA | 第25-26页 |
| ·以 cDNA 为模板 PCR 扩增 Runx3 片段 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物胶进行回收并加以纯化 | 第27页 |
| ·双酶切 PCR 产物和 pGEX-4T-1 载体 | 第27-28页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH16b | 第28-29页 |
| ·抽提重组质粒及检测 | 第29-30页 |
| ·重组质粒表达蛋白 | 第30-31页 |
| ·重组质粒转化 BL21 表达菌株 | 第30页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第30页 |
| ·包涵体蛋白质纯化及抗体制备 | 第30-31页 |
| ·表达的蛋白抗原免疫 BALB/c 小鼠和新西兰纯种白兔 | 第31-32页 |
| ·蛋白抗原与佐剂混合 | 第31页 |
| ·免疫动物 | 第31页 |
| ·免疫血清制备 | 第31-32页 |
| ·抗体检测 | 第32-33页 |
| ·阳性 control 样品制备 | 第32页 |
| ·原代组织样品制备 | 第32页 |
| ·Western blot 检测抗体 | 第32-33页 |
| ·结果及分析 | 第33-42页 |
| ·Runx3 目的片段的获得 | 第33-34页 |
| ·pGEX-4T-1-Runx3 重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组克隆测序结果 | 第37页 |
| ·重组克隆蛋白表达 | 第37-38页 |
| ·纯化后蛋白定量 | 第38-39页 |
| ·抗体检测 | 第39-42页 |
| 第三章 抗体体内及外传表达实验 | 第42-46页 |
| ·免疫荧光 | 第42-43页 |
| ·材料与方法 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43页 |
| ·流式细胞分选 | 第43-44页 |
| ·材料与方法 | 第43-44页 |
| ·胸腺细胞分选 | 第44页 |
| ·western 实验 | 第44-45页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| 第四章 结论与展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
