| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-22页 |
| ·大豆转基因研究进展 | 第11-16页 |
| ·大豆遗传转化技术 | 第11-15页 |
| ·国内外研究成果 | 第15-16页 |
| ·大豆磷胁迫研究 | 第16-21页 |
| ·植物的低磷胁迫反应 | 第16-17页 |
| ·低磷胁迫对大豆形态性状的影响 | 第17-18页 |
| ·低磷胁迫下大豆生理生化的变化 | 第18-19页 |
| ·低磷胁迫下基因水平的研究 | 第19-21页 |
| ·本文研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 植物表达载体的构建 | 第22-43页 |
| ·材料与试剂 | 第22-23页 |
| ·菌种与质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·抗生素与培养基成分 | 第22页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第23-31页 |
| ·试剂盒提取植物RNA(Omega) | 第23-24页 |
| ·RT-PCR | 第24-25页 |
| ·PCR扩增基因片段OsPTF1 | 第25页 |
| ·PCR扩增基因NOS片段 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖电泳,胶回收 | 第26-27页 |
| ·连接到T载体 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态的热激转化过程 | 第27页 |
| ·转化子PCR检测 | 第27-28页 |
| ·T-OsPTF1质粒和T-Nos用BstEⅡ、EcoRⅠ双酶切 | 第28页 |
| ·酶切产物的连接 | 第28-29页 |
| ·BamH Ⅰ 、EcoR Ⅰ双酶切T-OsPTF1-NOS和p-1300-221 | 第29页 |
| ·酶切产物在T4连接酶下连接 | 第29-30页 |
| ·HirdⅢ、EcoR Ⅰ双酶切 | 第30页 |
| ·酶切产物在T4连接酶下连接得到预期完整质粒 | 第30页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第30-31页 |
| ·植物表达载体转化根癌农杆菌EHA105 | 第31页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-39页 |
| ·实验流程图 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增OsPTF1基因连接到T-Vector | 第32-33页 |
| ·PCR扩增NOS基因连接到T-Vector | 第33-34页 |
| ·BstEⅡ、EcoR Ⅰ双酶切T-OsPTF1 | 第34页 |
| ·T-NOS载体BstEⅡ、EcoR Ⅰ双酶切 | 第34-35页 |
| ·OsPTF1和NOS的连接 | 第35-36页 |
| ·BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ酶切T-OsPTF1-NOS和p-1300-221 | 第36页 |
| ·OsPTF1-NOS和p-1300-221的连接 | 第36-37页 |
| ·HindⅢ、EcoR Ⅰ酶切p-1300-221-OsPTF1-Nos和pTF101.1 | 第37页 |
| ·35S-OsPTF1-NOS和pTF101.1的连接 | 第37-38页 |
| ·pTF101.1-35S-OsPTF1-NOS完整载体的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-43页 |
| ·DNA和RNA的提取中常见问题 | 第40页 |
| ·PCR常见问题 | 第40-41页 |
| ·限制性酶切和连接反应 | 第41-42页 |
| ·筛选标记基因 | 第42-43页 |
| 3 农杆菌介导的大豆遗传转化体系的研究 | 第43-59页 |
| ·材料与方法 | 第43-49页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·主要试剂配制 | 第43-44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·植物培养基配方 | 第44-46页 |
| ·大豆愈伤诱导体系的优化 | 第46-47页 |
| ·农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化体系的建立 | 第47-48页 |
| ·抗性植株的检测 | 第48-49页 |
| ·影响大豆子叶节愈伤诱导因素的研究 | 第49-56页 |
| ·大豆发芽时间摸索 | 第49-51页 |
| ·大豆侵染方式摸索 | 第51-52页 |
| ·大豆品种摸索 | 第52-53页 |
| ·大豆受体的选择 | 第53-54页 |
| ·出苗方式的选择 | 第54-56页 |
| ·抗性植株的检测 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-59页 |
| ·OsPTF1基因 | 第56-57页 |
| ·不同侵染部位对转化的影响 | 第57页 |
| ·不同大豆基因型对转化的影响 | 第57-58页 |
| ·愈伤褐化 | 第58页 |
| ·筛选浓度的影响 | 第58-59页 |
| 4 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 个人简历 | 第68页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第68页 |
| 参与的科研项目 | 第68页 |
| 获得成果 | 第68页 |
