| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·玉米弯孢霉叶斑病的发生与防治研究 | 第11-13页 |
| ·玉米弯孢霉叶斑病的病原菌 | 第11页 |
| ·玉米弯孢霉叶斑病的发生危害情况 | 第11-12页 |
| ·玉米弯孢霉叶斑病的发生条件 | 第12页 |
| ·玉米弯孢霉叶斑病的防治 | 第12-13页 |
| ·玉米弯孢霉叶斑病菌的致病机理 | 第13-15页 |
| ·机械力量 | 第13-14页 |
| ·化学作用 | 第14-15页 |
| ·细胞壁降解酶 | 第14页 |
| ·毒素 | 第14-15页 |
| ·玉米病原性真菌致病性相关MAP Kinases的研究 | 第15-20页 |
| ·MAP Kinase信号传导途径 | 第15-16页 |
| ·与Fus3/Kss1 同源的MAPK基因 | 第16-18页 |
| ·灰霉病菌（Botrytis cinerea）Bmp1 | 第16页 |
| ·小斑病菌（Cochliobolus heterostrophus）Chk1 | 第16页 |
| ·弯孢霉叶斑病菌（Curvularia lunata）Clk1 | 第16-17页 |
| ·禾谷镰孢病菌（Fusarium graminearum）Gpmk1 | 第17页 |
| ·大斑病菌（Setosphaeria turcica）Stk2 | 第17页 |
| ·黑粉病菌（Ustilago maydis）Kpp2, Kpp6 | 第17-18页 |
| ·与Slt2 同源的MAPK基因 | 第18-19页 |
| ·灰霉病菌（B. cinerea）Bmp3 | 第18页 |
| ·小斑病菌（C. heterostrophus）ChMp51 | 第18页 |
| ·禾谷镰孢病菌（F. graminearum）Mgv1 | 第18页 |
| ·黑粉病菌（U. maydis）Mpk1 | 第18-19页 |
| ·与H091 同源的MAPK基因 | 第19-20页 |
| ·灰霉病菌（B. cinerea）Bcsak1 | 第19页 |
| ·小斑病菌（C. heterostrophus）H091 | 第19页 |
| ·大斑病菌（S. turcica）Stk1 | 第19-20页 |
| ·展望 | 第20页 |
| ·本研究的立题依据和目的意义 | 第20-22页 |
| 第二章 玉米弯孢霉叶斑病菌Clml 基因的克隆分析 | 第22-41页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·菌株和载体 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·Clm1 基因同源片段的克隆 | 第23-26页 |
| ·Clm1 同源基因的保守序列比对 | 第23页 |
| ·Clm1 基因的保守序列的引物设计 | 第23-24页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第24页 |
| ·Clm1 基因的保守序列的PCR扩增 | 第24页 |
| ·PCR片段的纯化和克隆 | 第24页 |
| ·Clm1 基因保守序列的Southern Blotting分析 | 第24-25页 |
| ·Inverse PCR 克隆Clm1 基因的未知序列部分 | 第25页 |
| ·总RNA的提取以及纯化 | 第25-26页 |
| ·单链cDNA的合成 | 第26页 |
| ·3’RACE | 第26页 |
| ·生物信息学分析 | 第26页 |
| ·Clm1 基因启动子的鉴定 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-39页 |
| ·Clm1 基因的克隆 | 第27-31页 |
| ·Clm1 基因的保守序列的扩增 | 第27页 |
| ·Clm1 基因保守序列的Southern Blotting分析 | 第27-28页 |
| ·Clm1 基因未知序列的扩增 | 第28-30页 |
| ·Clm1 基因3’RACE分析及Clm1 基因序列的扩增 | 第30-31页 |
| ·生物信息学分析 | 第31-36页 |
| ·Clm1 基因编码蛋白的理化性质分析 | 第31-32页 |
| ·Clm1 磷酸化位点的预测 | 第32页 |
| ·Clm1 保守结构域分析 | 第32-33页 |
| ·Clm1 基因编码氨基酸同源性分析 | 第33-34页 |
| ·Clm1 基因编码蛋白的亚细胞定位预测 | 第34-35页 |
| ·Clm1 基因启动子区分析 | 第35-36页 |
| ·Clm1 基因启动子的鉴定 | 第36-39页 |
| ·Clm1 基因5’非编码区与eGFP报告基因的融合构建 | 第36-37页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第37-38页 |
| ·转化子的荧光观察 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 玉米弯孢霉叶斑病菌Clm1 基因的敲除 | 第41-53页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌株和载体 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-46页 |
| ·敲除载体构建的流程 | 第42-43页 |
| ·敲除载体的构建 | 第43页 |
| ·两端侧翼序列的扩增 | 第43页 |
| ·潮霉素B抗性基因表达元件的分离 | 第43页 |
| ·质粒的提取和PCR片段的纯化克隆 | 第43页 |
| ·敲除载体的转化 | 第43-44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的的制备 | 第43-44页 |
| ·转化农杆菌 | 第44页 |
| ·农杆菌介导的转化 | 第44页 |
| ·敲除子的验证 | 第44-46页 |
| ·敲除子PCR检测 | 第44-45页 |
| ·敲除子Southern blotting检测 | 第45-46页 |
| ·敲除子RT-PCR检测 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·同源敲除载体的构建 | 第46-48页 |
| ·5’端和3’端侧翼序列的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·潮霉素B抗性基因表达元件的分离 | 第47页 |
| ·同源敲除载体的检验 | 第47-48页 |
| ·同源重组转化子的获得 | 第48-49页 |
| ·敲除子的筛选 | 第49-52页 |
| ·PCR检测 | 第49-51页 |
| ·Southern blotting | 第51页 |
| ·RT-PCR检测 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 Clm1 基因敲除子基础生物学性状分析 | 第53-63页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌株 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·菌落形态的观察 | 第54页 |
| ·生长速度的测定 | 第54页 |
| ·分生孢子数量、形态与附着胞形成的观测 | 第54页 |
| ·色素性状的影响 | 第54-55页 |
| ·细胞壁完整性检测 | 第55页 |
| ·透射电镜显微观察 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-60页 |
| ·菌落形态的观察 | 第56页 |
| ·生长速度的测定 | 第56-57页 |
| ·分生孢子数量、形态与附着胞形成的观测 | 第57-58页 |
| ·色素性状的检测 | 第58-59页 |
| ·细胞壁完整性性状观测 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·Clm1 基因与分生孢子的产生与菌丝生长 | 第60-61页 |
| ·Clm1 基因与色素 | 第61-63页 |
| 第五章 Clm1 基因敲除子致病相关性状分析 | 第63-76页 |
| ·材料 | 第63-65页 |
| ·菌株和植株 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63-64页 |
| ·主要仪器 | 第64-65页 |
| ·方法 | 第65-67页 |
| ·致病性检测 | 第65页 |
| ·细胞壁降解酶活性测定 | 第65-66页 |
| ·纤维素酶活性测定 | 第65-66页 |
| ·果胶酶活性测定 | 第66页 |
| ·毒素提取与检测 | 第66-67页 |
| ·粗毒素的提取 | 第66-67页 |
| ·粗毒素的薄层层析 | 第67页 |
| ·粗毒素的致病性测定 | 第67页 |
| ·毒素相关基因表达量检测 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-74页 |
| ·离体致病性测定 | 第67-70页 |
| ·菌片接种 | 第67-68页 |
| ·分生孢子悬浮液接种 | 第68-69页 |
| ·培养滤液接种 | 第69-70页 |
| ·细胞壁降解酶活性的测定 | 第70-72页 |
| ·纤维素酶Cx活性的测定 | 第70-71页 |
| ·果胶酶PG、PMG活性的测定 | 第71-72页 |
| ·毒素的产生与致病性测定 | 第72-74页 |
| ·薄层层析检测 | 第72-73页 |
| ·致病性测定 | 第73页 |
| ·毒素相关基因表达量检测 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 总结与展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第87-89页 |
