紫花苜蓿铝胁迫消减杂交文库的构建
| 致谢 | 第1-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 图表一览 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1.文献综述 | 第12-28页 |
| ·铝对植物的毒害作用 | 第12-13页 |
| ·土壤中铝的存在形态 | 第12页 |
| ·铝毒发生机理 | 第12-13页 |
| ·植物耐铝性状的遗传位点 | 第13-14页 |
| ·耐铝质量性状遗传位点 | 第13-14页 |
| ·数量性状遗传位点 | 第14页 |
| ·植物耐铝的基因组分析 | 第14-17页 |
| ·基因表达谱及耐铝相关基因克隆 | 第14-17页 |
| ·蛋白表达 | 第17页 |
| ·转基因与植物耐铝性的提高 | 第17-18页 |
| ·紫花苜蓿耐铝研究进展 | 第18-21页 |
| ·抑制消减杂交技术的应用 | 第21-27页 |
| ·抑制消减杂交技术的原理 | 第21-22页 |
| ·SSH在植物抗性基因克隆中的应用 | 第22-27页 |
| ·本课题的研究目的和研究内容 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-40页 |
| ·供试植物材料 | 第28页 |
| ·主要试剂与仪器设备 | 第28-29页 |
| ·紫花苜蓿适宜铝胁迫浓度的确定(试验1) | 第29页 |
| ·试验设计 | 第29页 |
| ·试验步骤 | 第29页 |
| ·测定项目及方法 | 第29页 |
| ·紫花苜蓿铝胁迫消减文库的构建(试验2) | 第29-40页 |
| ·试验设计 | 第29-30页 |
| ·苜蓿根组织总RNA的提取和mRNA的纯化 | 第30-31页 |
| ·cDNA的合成 | 第31-33页 |
| ·RsaⅠ酶切 | 第33页 |
| ·接头连接 | 第33-35页 |
| ·抑制消减杂交 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增和产物纯化 | 第36-37页 |
| ·T-A克隆及文库的保存 | 第37-38页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·克隆产物的测序及EST序列的同源性比较 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-50页 |
| ·紫花苜蓿铝胁迫浓度的确定 | 第40页 |
| ·文库的构建 | 第40-47页 |
| ·总RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·mRNA的纯化 | 第41-42页 |
| ·RsaⅠ酶切 | 第42-43页 |
| ·接头连接效率 | 第43页 |
| ·消减杂交后PCR扩增 | 第43-45页 |
| ·消减杂交效率 | 第45-46页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第46-47页 |
| ·文库的检测与分析 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-55页 |
| ·紫花苜蓿铝铝胁迫相关基因分析 | 第50-52页 |
| ·实验中注意的具体事项 | 第52-53页 |
| ·关于胁迫浓度和胁迫时间的选择 | 第52页 |
| ·酶切的有效性 | 第52页 |
| ·引物的设计 | 第52-53页 |
| ·接头的连接效率 | 第53页 |
| ·SSH的有效性 | 第53页 |
| ·后续的工作思路 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-67页 |
| 英文摘要 | 第67-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 附录1:LB液体培养基 | 第69页 |
| 附录2:SOB液体培养基 | 第69页 |
| 附录3:SOC液体培养基 | 第69-70页 |
| 附录4:PGEM T-Easy载体 | 第70页 |
| 附录5:抑制PCR原理图 | 第70页 |
| 附录6:SSH中接头和引物序列 | 第70-71页 |
| 附录7:在读硕士期间发表的论文 | 第71页 |
