中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-9页 |
1. 前言 | 第9-22页 |
1.1 研究目的与意义 | 第9页 |
1.2 文献综述 | 第9-22页 |
1.2.1 植物遗传转化研究 | 第9-15页 |
1.2.1.1 植物遗传转化方法 | 第9-13页 |
1.2.1.2 报告基因和选择标记基因 | 第13-14页 |
1.2.1.3 植物转化体的筛选与检测 | 第14-15页 |
1.3.1 大豆遗传转化研究进展 | 第15-18页 |
1.3.1.1 大豆的再生系统 | 第15-17页 |
1.3.1.2 大豆遗传转化方法及进展 | 第17-18页 |
1.4.1 植物抗病虫基因 | 第18-22页 |
1.4.1.1 Chi基因在植物抗真菌病基因工程中的应用 | 第19-20页 |
1.4.1.2 Bt基因在植物抗虫基因工程中的应用 | 第20-22页 |
2. 材料与方法 | 第22-28页 |
2.1 试验材料 | 第22页 |
2.1.1 植物材料 | 第22页 |
2.1.2 农杆菌菌株 | 第22页 |
2.2 试验方法 | 第22-25页 |
2.2.1 大豆子叶节再生系统的建立 | 第22-23页 |
2.2.1.1 外植体的获得 | 第22-23页 |
2.2.1.2 基因型的筛选 | 第23页 |
2.2.1.3 激素浓度的筛选 | 第23页 |
2.2.2 大豆子叶节的农杆菌转化及影响因素的筛选 | 第23-25页 |
2.2.2.1 菌液的制备 | 第23-24页 |
2.2.2.2 菌株生长曲线的确定 | 第24页 |
2.2.2.3 选择剂适宜浓度的筛选 | 第24页 |
2.2.2.4 杀菌剂适宜浓度的筛选 | 第24页 |
2.2.2.5 预培养、侵染和共培养时间的筛选 | 第24页 |
2.2.2.6 农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化 | 第24-25页 |
2.2.2.7 GUS基因的检测 | 第25页 |
2.3 转化体的PCR检测 | 第25-28页 |
2.3.1 碱裂解法提取质粒DNA | 第25-26页 |
2.3.2 SDS法提取大豆总DNA | 第26页 |
2.3.3 PCR检测 | 第26-28页 |
2.3.3.1 Chi基因检测 | 第26-27页 |
2.3.3.2 Bt基因检测 | 第27-28页 |
3. 结果与分析 | 第28-44页 |
3.1 大豆子叶节再生系统的建立 | 第28-44页 |
3.1.1 大豆基因型的筛选 | 第28页 |
3.1.2 大豆再生系统激素浓度的确定 | 第28-34页 |
3.1.2.1 分化培养基激素浓度的确定 | 第28-33页 |
3.1.2.2 生根培养基激素浓度的确定 | 第33-34页 |
3.1.3 农杆菌转化大豆子叶节及影响因素的确定 | 第34-40页 |
3.1.3.1 菌株活化时间的确定 | 第34-35页 |
3.1.3.2 选择剂适宜浓度的确定 | 第35页 |
3.1.3.3 杀菌剂适宜浓度的确定 | 第35页 |
3.1.3.4 预培养、侵染和共培养时间的确定 | 第35-40页 |
3.1.4 PCR检测结果 | 第40-44页 |
3.1.4.1 抗性芽的PCR检测 | 第40页 |
3.1.4.2 抗性植株的PCR检测 | 第40-44页 |
4. 讨论 | 第44-47页 |
4.1 大豆再生频率较高的基因型筛选 | 第44页 |
4.2 激素浓度的筛选 | 第44页 |
4.3 影响农杆菌遗传转化效率的因素 | 第44-47页 |
4.3.1 组织的来源及其发育状态 | 第45页 |
4.3.2 预培养、侵染和共培养时间 | 第45页 |
4.3.3 Vir区的诱导活化 | 第45-46页 |
4.3.4 选择剂的使用 | 第46-47页 |
5. 结论 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-54页 |
附录 | 第54-56页 |
图版 | 第56-61页 |
致谢 | 第61页 |