| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一部分 绪论 | 第8-22页 |
| 1.嗜热酶 | 第8-15页 |
| ·嗜热酶的结构特性 | 第8-13页 |
| ·嗜热酶自身的结构特点 | 第9-12页 |
| ·嗜热酶结构以外的因素 | 第12-13页 |
| ·嗜热酶的应用前景 | 第13-15页 |
| 2.丙酮酸脱氢酶结构与功能 | 第15-22页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的结构及功能 | 第15-18页 |
| ·丙酮酸脱氢酶的功能调控 | 第18-22页 |
| ·E1调节机制的磷酸化位点特异性 | 第20-21页 |
| ·E1调节机制的多PDK、PDP同工酶特性 | 第21-22页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第22-35页 |
| 1.实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第22页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第22页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第22-24页 |
| ·主要设备仪器 | 第24-25页 |
| 2.实验方法 | 第25-35页 |
| ·实验流程技术路线 | 第25-26页 |
| ·E1的克隆和表达载体的构建 | 第26-32页 |
| ·嗜热菌Thermus.thermopHilus HB8基因组的提取 | 第26页 |
| ·基因组DNA鉴定 | 第26-27页 |
| ·E1基因的扩增和产物纯化回收 | 第27-29页 |
| ·T-A克隆及重组质粒DNA序列测定 | 第29-31页 |
| ·重组表达载体构建 | 第31页 |
| ·T4 DNA Ligase连接pGEM-T-E1和pTrcHisC | 第31-32页 |
| ·E1的纯化和酶动力学数据测定 | 第32-35页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| ·细菌的破碎 | 第32页 |
| ·蛋白的亲和层析 | 第32-33页 |
| ·蛋白的透析 | 第33页 |
| ·蛋白的浓缩 | 第33页 |
| ·蛋白的酶活测定 | 第33-35页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第35-43页 |
| 1.电泳检测基因组DNA结果 | 第35页 |
| 2.PCR扩增E1基因 | 第35-36页 |
| 3.重组质粒pGEM-T-E1的PCR法快速鉴定阳性克隆 | 第36页 |
| 4.重组质粒pGEM-T-E1的酶切 | 第36-37页 |
| 5.重组质粒pTrcHisC-E1的克隆和鉴定 | 第37-38页 |
| 6.E1的亲和层析纯化 | 第38页 |
| 7.E1的酶动力学 | 第38-43页 |
| ·温度梯度 | 第39-40页 |
| ·缓冲液PH梯度 | 第40-41页 |
| ·底物浓度梯度 | 第41-43页 |
| 第四部分 讨论 | 第43-48页 |
| 1.蛋白纯化中的各类问题 | 第43-45页 |
| 2.酶动力学测定 | 第45-46页 |
| 3.结果和展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
