| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-22页 |
| ·研究的目的意义 | 第16-17页 |
| ·国内外的研究现状 | 第17-20页 |
| ·研究内容和方法 | 第20-22页 |
| ·Tsol18 基因的克隆和优化表达 | 第20-21页 |
| ·重组活载体口服疫苗的构建 | 第21页 |
| ·重组活载体疫苗的免疫学研究 | 第21-22页 |
| 第二章 Tsol18 基因的克隆、优化表达及高免血清的制备 | 第22-44页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·菌种和试剂 | 第23页 |
| ·仪器与设备 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-36页 |
| ·猪带绦虫虫卵的活化 | 第25-26页 |
| ·六钩蚴总RNA 的提取 | 第26页 |
| ·Tsol18 基因的RT-PCR 扩增 | 第26-28页 |
| ·pGEX-4T-Tsol18 表达载体的构建 | 第28-31页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第31页 |
| ·表达产物的检测 | 第31-32页 |
| ·表达产物的表达形式分析 | 第32-33页 |
| ·表达蛋白纯化和稳定性分析 | 第33-35页 |
| ·重组蛋白Tsol18 高免血清的制备 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-40页 |
| ·Tsol18 的RT-PCR 扩增 | 第36页 |
| ·表达载体的鉴定与序列分析 | 第36-38页 |
| ·表达产物的检测 | 第38-39页 |
| ·表达蛋白纯化和稳定性分析 | 第39页 |
| ·免疫兔血清的效价 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-44页 |
| ·选择Tsol18 作为免疫保护基因的原因 | 第40-42页 |
| ·Tsol18 的表达形式和稳定性 | 第42-44页 |
| 第三章 表达 Tsol18 抗原的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 疫苗菌的构建 | 第44-62页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·菌种和质粒 | 第45-46页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·溶液的配制 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-55页 |
| ·TsoL18 目的基因的制备 | 第47-49页 |
| ·pYA3341-Tsol18 重组质粒的构建和筛选 | 第49-52页 |
| ·pYA3341-Tsol18 重组质粒依次转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X3730 和X4550 | 第52-53页 |
| ·4550（pYA3341-Tsol18）重组菌表达蛋白的测定 | 第53-54页 |
| ·重组菌的体外稳定性试验 | 第54页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第54-55页 |
| ·重组菌的安全性试验 | 第55页 |
| ·重组疫苗株口服免疫后在小鼠体内的分布 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-59页 |
| ·Tsol18 目的基因的制备 | 第55页 |
| ·pYA3341-Tsol18 重组质粒的鉴定 | 第55-56页 |
| ·Tsol18 重组蛋白的表达及Westren blot 分析 | 第56-57页 |
| ·Tsol18 重组蛋白的Westren blot 分析 | 第57页 |
| ·重组菌X4550（pYA3341-Tsol18）的体外稳定性 | 第57页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第57-58页 |
| ·重组菌的安全性实验 | 第58页 |
| ·重组疫苗株口服免疫后在小鼠体内的分布 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 第四章 重组疫苗菌 X4550(pYA3341-Tsol18)的免疫学研究 | 第62-80页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·菌种和质粒 | 第63页 |
| ·实验动物 | 第63页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第63页 |
| ·培养液 | 第63页 |
| ·溶液的配制 | 第63-64页 |
| ·重组菌X4550（pYA3341-Tsol18）和X4550（pYA3341）的大量制备 | 第64页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第64-66页 |
| ·实验小鼠分组 | 第64页 |
| ·实验小鼠免疫 | 第64-65页 |
| ·免疫小鼠血清的收集 | 第65页 |
| ·免疫小鼠肠道分泌性抗Tsol18 IgA 抗体的测定 | 第65页 |
| ·免疫小鼠抗Tsol18 抗体的检测 | 第65-66页 |
| ·免疫小鼠脾脏T 淋巴细胞亚群的测定 | 第66页 |
| ·猪免疫实验 | 第66-68页 |
| ·重组菌X4550（pYA3341-Tsol18）和X4550（pYA3341）的大量制备 | 第66-67页 |
| ·实验动物的分组与口服接种 | 第67页 |
| ·实验猪血清抗体的检测 | 第67-68页 |
| ·实验结果 | 第68-72页 |
| ·ELISA 最佳条件的选择 | 第68页 |
| ·免疫小鼠血清抗Tsol18 抗体的检测 | 第68-70页 |
| ·免疫小鼠脾脏T 淋巴细胞亚群的测定 | 第70-71页 |
| ·实验猪血清抗体的检测 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-80页 |
| ·寄生虫免疫逃避机制 | 第72-75页 |
| ·粘膜免疫 | 第75-78页 |
| ·粘膜免疫的优点 | 第78页 |
| ·小鼠免疫实验分析 | 第78-79页 |
| ·猪免疫实验分析 | 第79-80页 |
| 第五章 全文结论 | 第80-81页 |
| 第六章 文献综述减毒沙门氏菌作为口服疫苗活载体的研究进展 | 第81-101页 |
| ·沙门氏菌减毒的相关基因 | 第82-84页 |
| ·控制芳香族化合物生物合成的aro 基因 | 第82-83页 |
| ·影响碳水化合物利用途径的galE 基因 | 第83页 |
| ·pur 系列基因 | 第83页 |
| ·asd 基因 | 第83页 |
| ·htrA 基因 | 第83页 |
| ·cya、crp 基因 | 第83-84页 |
| ·减毒沙门氏菌载体激发的免疫应答 | 第84-86页 |
| ·载体减毒沙门氏菌表达系统的构建 | 第86-88页 |
| ·质粒表达系统 | 第86-87页 |
| ·染色体整合系统 | 第87页 |
| ·载体-宿主平衡致死系统 | 第87-88页 |
| ·沙门氏菌进入机体免疫系统的机制 | 第88-93页 |
| ·沙门氏菌通过粘膜上皮M 细胞进入机体 | 第89-92页 |
| ·沙门氏菌被树突细胞直接从肠腔摄取进入机体 | 第92-93页 |
| ·减毒沙门氏菌的应用 | 第93-98页 |
| ·常用的减毒沙门氏菌菌株 | 第93-94页 |
| ·携带DNA 疫苗的重组减毒沙门氏菌的应用 | 第94-96页 |
| ·表达外源抗原的重组减毒沙门氏菌疫苗的应用 | 第96-98页 |
| ·减毒沙门氏菌载体疫苗的优越性 | 第98-100页 |
| ·抗原呈递的有效性 | 第98页 |
| ·细菌载体的佐剂作用 | 第98页 |
| ·细菌CpG 序列 | 第98-99页 |
| ·激发粘膜免疫 | 第99页 |
| ·减毒沙门氏菌运载效应易于强化 | 第99页 |
| ·免疫具有持续性 | 第99页 |
| ·抗原不需提纯 | 第99页 |
| ·应用方便 | 第99-100页 |
| ·潜在的危险性 | 第100-101页 |
| ·弱毒细菌的危险性 | 第100页 |
| ·质粒DNA 的危险性 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-115页 |
| 附录 | 第115-123页 |
| 致谢 | 第123-125页 |
| 作者简历 | 第125-126页 |
