| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩写词 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| 1 番木瓜研究的意义 | 第11-12页 |
| ·番木瓜的营养保健价值 | 第11页 |
| ·番木瓜生产的经济效益和社会效益 | 第11-12页 |
| ·番木瓜生产的经济效益 | 第11-12页 |
| ·番木瓜生产的社会效益 | 第12页 |
| 2 果实软化的相关研究 | 第12-15页 |
| ·果实细胞壁结构的研究 | 第12-13页 |
| ·与果实软化相关的水解酶类研究 | 第13-14页 |
| ·β-GAL研究进展 | 第14-15页 |
| 3 启动子 | 第15-18页 |
| ·启动子的结构 | 第15页 |
| ·启动子的分类 | 第15-17页 |
| ·组成型启动子 | 第15-16页 |
| ·组织特异性启动子 | 第16页 |
| ·诱导型启动子 | 第16-17页 |
| ·启动子的研究方法 | 第17-18页 |
| ·离体瞬间表达检测 | 第17页 |
| ·转基因植物的稳定表达检测 | 第17-18页 |
| 4 本研究的目的意义 | 第18-19页 |
| 5 本研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 番木β-GAL同源基因启动子的克隆 | 第20-55页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第20页 |
| ·购买的试剂、酶及药品等 | 第20页 |
| ·常用溶液试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-27页 |
| ·番木瓜叶片基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·改良的CTAB法 | 第21-22页 |
| ·采用试剂盒提取基因组DNA | 第22页 |
| ·检测所提取的DNA的质量 | 第22页 |
| ·基因组DNA的酶切及纯化 | 第22页 |
| ·自连接与纯化 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·番木瓜β-GAL同源基因启动子的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·IPCR反应 | 第23-24页 |
| ·PCR反应 | 第24页 |
| ·目的片段纯化回收 | 第24-25页 |
| ·PCR目的片段与T载体的连接 | 第25-26页 |
| ·宿主菌E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·PCR检测 | 第26-27页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-55页 |
| ·番木瓜基因组DNA的提取结果 | 第27-28页 |
| ·酶切结果 | 第28-29页 |
| ·IPCR结果分析 | 第29-53页 |
| ·第一次IPCR结果分析 | 第30-43页 |
| ·常规PCR克隆中间区域结果分析 | 第43-44页 |
| ·第二次IPCR结果分析 | 第44-49页 |
| ·第三次IPCR结果分析 | 第49-50页 |
| ·第三次拼接结果分析 | 第50-53页 |
| ·转录起始位点和启动子调控元件的预测 | 第53-55页 |
| 第三章 启动子缺失表达载体的构建 | 第55-60页 |
| 1 试验材料 | 第55页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第55页 |
| ·购买的试剂、酶及药品等 | 第55页 |
| ·常用溶液试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器和设备 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-58页 |
| ·番木瓜叶片基因组DNA的提取 | 第55页 |
| ·pCAMBIA1301质粒的提取 | 第55页 |
| ·载体大片段的准备 | 第55-56页 |
| ·启动子片段的准备 | 第56-57页 |
| ·载体大片段与启动子片段的连接 | 第57页 |
| ·连接产物的转化E.coli DH5α | 第57页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-60页 |
| 第四章.根癌农杆菌介导的GUS融合基因的瞬间表达 | 第60-64页 |
| 1 试验材料 | 第60页 |
| ·植物材料 | 第60页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第60页 |
| ·购买的试剂、酶及药品等 | 第60页 |
| ·常用溶液试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器和设备 | 第60页 |
| 2 试验方法 | 第60-62页 |
| ·农杆菌LBA4404感受态细胞制备 | 第60-61页 |
| ·重组质粒转化根癌农杆菌 | 第61页 |
| ·阳性菌的鉴定 | 第61页 |
| ·农杆菌的侵染 | 第61页 |
| ·工程菌液的制备 | 第61页 |
| ·共培养 | 第61页 |
| ·GUS融合基因的瞬间表达 | 第61-62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-64页 |
| ·阳性菌的鉴定 | 第62页 |
| ·GUS融合基因的瞬间表达 | 第62-64页 |
| 第五章 讨论 | 第64-67页 |
| 1 番木瓜基因组DNA的分离与纯化 | 第64页 |
| 2 IPCR巢式引物的设计 | 第64-65页 |
| 3 IPCR结果序列的分析比对 | 第65页 |
| 4 IPCR的5'端定向步移 | 第65-66页 |
| 5 研究展望 | 第66-67页 |
| 第六章 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录1 第一次IPCR测序结果 | 第74-75页 |
| 附录2 常规PCR克隆中间区域测序结果 | 第75-76页 |
| 附录3 第二次IPCR测序结果(D10.CS070312609_603) | 第76-77页 |
| 附录4 第三次IPCR测序结果 | 第77-78页 |
| 附录5 PCR扩增预测的β-GAL同源基因启动子测序结果 | 第78-79页 |
| 附录6 番木瓜β-GAL同源基因启动子的PLACE分析结果 | 第79-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
