| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-19页 |
| ·研究的背景 | 第13-15页 |
| ·甲型流感病毒非结构蛋白NS1 | 第13页 |
| ·双分子荧光互补技术 | 第13-14页 |
| ·金丝桃素 | 第14-15页 |
| ·研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| ·甲型流感病毒非结构蛋白NS1抑制剂筛选 | 第15-16页 |
| ·双分子荧光互补（BiFC)模型的构建 | 第16页 |
| ·金丝桃素合酶基因 | 第16页 |
| ·实验设计 | 第16-19页 |
| ·甲型流感病毒非结构蛋白NS1抑制剂筛选 | 第16-17页 |
| ·BiFC模型的构建 | 第17页 |
| ·金丝桃素合酶基因的快速克隆及功能鉴定 | 第17-19页 |
| 第二章 材料及方法 | 第19-27页 |
| ·材料 | 第19-23页 |
| ·工具酶及抗体 | 第19页 |
| ·试剂盒 | 第19页 |
| ·分子量标准 | 第19页 |
| ·菌种和质粒载体 | 第19页 |
| ·培养基成分 | 第19-20页 |
| ·PCR引物 | 第20页 |
| ·抗生素 | 第20页 |
| ·其它试剂及工具 | 第20-21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·溶液配制 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·感受态的制备 | 第23-24页 |
| ·DNA的酶切、TA连接及转化 | 第24页 |
| ·Western blot方法 | 第24页 |
| ·HPLC法分析和制备 | 第24-25页 |
| ·PCR反应 | 第25-26页 |
| ·In-fusion 连接 | 第26-27页 |
| 第三章 甲型流感病毒非结构蛋白NS1抑制剂筛选 | 第27-37页 |
| ·实验方法 | 第27-30页 |
| ·酵母双杂交模型的构建 | 第27-28页 |
| ·药物筛选 | 第28-30页 |
| ·实验结果 | 第30-37页 |
| ·酵母双杂交模型构建 | 第30-31页 |
| ·药物筛选 | 第31-37页 |
| 第四章 双分子荧光互补模型的构建及应用 | 第37-49页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·大肠杆菌活化和质粒提取 | 第37页 |
| ·pFA6a-pGal 10CYCl-VC-KanMX6载体和pFA6a-pGal 10CYCl-VN-KanMX6载体的构建 | 第37页 |
| ·载体pGAL10CYC-VN的构建 | 第37页 |
| ·载体pGAL10CYC-VC的构建 | 第37-38页 |
| ·载体pGAL10CYCNSl-VN的构建 | 第38页 |
| ·载体pGAL10CYCCPSF-VC的构建 | 第38页 |
| ·酵母转化 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增验证模型正确性 | 第39页 |
| ·荧光模型在荧光显微镜下镜检 | 第39页 |
| ·荧光模型的复筛 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-49页 |
| ·大肠杆菌活化和质粒提取 | 第39-40页 |
| ·pFA6a-pGa 11 OCYC 1 -VC-KanMX6载体PFA6a-pGal 1 OCYC 1 -VN-KanMX6载体的构建 | 第40-41页 |
| ·载体pGALlOCYC-VN的构建 | 第41-42页 |
| ·载体pGAL10CYC-VC的构建 | 第42-44页 |
| ·载体pGAL10CYCNSl-VN的构建 | 第44-45页 |
| ·载体pGAL10CYCCPSF-VC的构建 | 第45-46页 |
| ·PCR扩增验证模型正确性 | 第46-47页 |
| ·荧光模型在荧光显微镜下镜检 | 第47页 |
| ·荧光模型的复筛 | 第47-49页 |
| 第五章 红色荧光蛋白在酿酒酵母中的表达特性研究 | 第49-53页 |
| ·实验方法 | 第49-50页 |
| ·ZefreJ基因的克隆 | 第49页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第49页 |
| ·重组表达载体的转化和诱导表达 | 第49-50页 |
| ·表达产物鉴定 | 第50页 |
| ·重组蛋白对酿酒酵母生长的影响 | 第50页 |
| ·重组蛋白表达特性的分析 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-53页 |
| ·AsreJ基因的克隆 | 第50页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·工程菌的筛选与诱导表达 | 第51页 |
| ·表达产物鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白对酿酒酵母菌的影响 | 第52页 |
| ·高渗环境中重组蛋白的表达特性 | 第52-53页 |
| 第六章 金丝桃素合酶基因的快速克隆及功能鉴定 | 第53-61页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·Hyp-1基因的快速克隆 | 第53页 |
| ·含Hyp-1基因的大肠杆菌表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·Hyp-1基因在￡C0〃中的表达及鉴定 | 第54页 |
| ·E.coli重组Hyp-1的蛋白印迹 | 第54页 |
| ·E.coli重组Hyp的酶促反应及产物分析 | 第54页 |
| ·发酵产物的检测 | 第54页 |
| ·实验结果 | 第54-61页 |
| ·Hyp-1基因的快速克隆结果 | 第54-55页 |
| ·含Hyp-1基因的大肠杆菌表达载体的构建 | 第55页 |
| ·Hyp-1基因的表达 | 第55-56页 |
| ·重组Hyp-1蛋白的免疫印迹 | 第56-57页 |
| ·E. coli重组Hyp-1酶促产物LC-MS/MS分析 | 第57-61页 |
| 第七章 讨论与结论 | 第61-65页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| ·甲型流感病毒非结构蛋白NS1抑制剂筛选 | 第61页 |
| ·双分子荧光互补模型的构建 | 第61-62页 |
| ·红色荧光蛋白在酿酒酵母中的表达特性研究 | 第62-63页 |
| ·金丝桃素的合成生物学研究 | 第63-64页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 攻读学位期间已发表和待发表的论文 | 第71页 |
