| 符号说明 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一部分 HBx 基因的原核表达及免疫原性鉴定 | 第17-29页 |
| 1 实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-23页 |
| ·含HBx 基因片断的表达质粒的构建 | 第19-21页 |
| ·技术设计路线 | 第19页 |
| ·针对HBx 基因的PCR 引物设计 | 第19-20页 |
| ·PCR 扩增 | 第20页 |
| ·Insert DNA 和Vector DNA 双酶切反应、纯化与连接反应 | 第20页 |
| ·感受态细菌的制备与连接产物的转化反应 | 第20页 |
| ·pGEX4T-2-HBX 重组质粒的鉴定 | 第20-21页 |
| ·含HBX 基因片段的GST 融合蛋白的表达与溶解性判断 | 第21页 |
| ·融合蛋白GST –HBX 的小量诱导表达 | 第21页 |
| ·融合蛋白GST –HBx 的大量诱导表达 | 第21页 |
| ·融合蛋白GST –HBx 溶解性判断 | 第21页 |
| ·包涵体的洗涤、溶解和复性 | 第21-22页 |
| ·融合蛋白的亲和层析纯化 | 第22页 |
| ·表达产物的免疫印迹分析 | 第22-23页 |
| 3 实验结果 | 第23-26页 |
| 4 讨论 | 第26-28页 |
| 5 结论 | 第28-29页 |
| 第二部分 抗HBx 单克隆抗体的制备、筛选及鉴定 | 第29-50页 |
| 1 实验材料 | 第29-31页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·细胞系 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-38页 |
| ·免疫动物 | 第31页 |
| ·间接ELISA 检测小鼠血清抗体效价 | 第31-32页 |
| ·细胞融合及建株 | 第32-35页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第32页 |
| ·SP2/0 细胞准备 | 第32页 |
| ·细胞融合前的准备 | 第32-33页 |
| ·细胞融合 | 第33页 |
| ·细胞融合后培养 | 第33页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第33-34页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的扩大培养及克隆化筛选 | 第34页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的建立 | 第34页 |
| ·杂交瘤细胞的扩增与保存 | 第34页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第34-35页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第35-36页 |
| ·杂交瘤细胞系稳定性的测定 | 第35页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第35-36页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第36页 |
| ·单克隆抗体 IgG 亚类及亚型测定 | 第36页 |
| ·间接ELISA 法测定单克隆抗体相对亲和力 | 第36页 |
| ·抗HBx 单克隆抗体特性的研究 | 第36-38页 |
| ·单克隆抗体的亲和常数测定 | 第37页 |
| ·抗体识别抗原表位的测定 | 第37页 |
| ·单克隆抗原的免疫反应特异性鉴定 | 第37-38页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性研究 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-45页 |
| ·小鼠免疫结果 | 第38-39页 |
| ·HBx 单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第39-41页 |
| ·杂交瘤细胞染色体的分析 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第40页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第40-41页 |
| ·间接ELISA 测定单克隆抗体的相对亲和力 | 第41页 |
| ·抗HBx 单克隆抗体特性的研究 | 第41-45页 |
| ·抗体亲和常数 | 第41-44页 |
| ·抗体识别抗原表位的测定 | 第44页 |
| ·单克隆抗体的免疫反应特异性鉴定 | 第44-45页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性研究 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 文献综述 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第60页 |