| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| ·水稻矮缩病毒的研究进展 | 第10-17页 |
| ·水稻矮缩病毒的概况 | 第10页 |
| ·水稻矮缩病毒基因组的研究进展 | 第10-11页 |
| ·水稻矮缩病毒的分子变异的研究进展 | 第11-12页 |
| ·基因组编码的蛋白功能研究 | 第12-15页 |
| ·病毒粒体三维结构的研究 | 第15-16页 |
| ·病毒复制组装的研究 | 第16-17页 |
| ·水稻细胞培养技术的应用 | 第17-18页 |
| ·本实验研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 水稻矮缩病毒在悬浮细胞内的表达 | 第19-42页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·供试毒源 | 第19页 |
| ·供试水稻 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·引物 | 第19-20页 |
| ·菌株和载体 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-30页 |
| ·水稻矮缩病毒的提取 | 第20-21页 |
| ·RDV病毒的粗提 | 第20页 |
| ·提取制剂的紫外扫描 | 第20-21页 |
| ·FITC标记RDV抗体的制备 | 第21-22页 |
| ·FITC标记RDV抗体 | 第21页 |
| ·非特异性染色的测定 | 第21页 |
| ·荧光抗体的F/P值(克分子比值)的测定 | 第21-22页 |
| ·悬浮细胞系的建立 | 第22-23页 |
| ·水稻种子成熟胚的诱导 | 第22页 |
| ·水稻悬浮细胞系的建立 | 第22页 |
| ·悬浮细胞活力的测定 | 第22-23页 |
| ·水稻悬浮细胞病毒侵染体系的建立 | 第23页 |
| ·RDV病毒接种水稻悬浮细胞 | 第23页 |
| ·荧光抗体染色统计感染病毒悬浮细胞的百分比 | 第23页 |
| ·ELISA检测RDV外壳蛋白P8在水稻悬浮细胞中的表达周期 | 第23-24页 |
| ·Western-blot检测RDV的P8和P9蛋白在水稻悬浮细胞中的表达动态 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第24-25页 |
| ·Westem-blot检测RDV两个外壳蛋白在细胞中的表达动态 | 第25页 |
| ·Northern blot检测RDV的P8和P9 mRNA的表达动态 | 第25-29页 |
| ·RDV-dsRNA的提取和纯化 | 第25-26页 |
| ·病毒基因组的琼脂糖电泳 | 第26页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| ·PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·目的片段的克隆 | 第27-28页 |
| ·目的片段的回收 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·连接反应物对宿主感受态细胞的转化 | 第27页 |
| ·质粒的少量提纯(碱法) | 第27页 |
| ·重组克隆的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·水稻悬浮细胞中RDV P8和P9 mRNA表达的检测 | 第28-29页 |
| ·地高辛标记的DNA探针制备 | 第28页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第28页 |
| ·RNA点杂交 | 第28-29页 |
| ·荧光定量RCR(Real-time PCR)检测RDV P8 mRNA的转录表达动态 | 第29-30页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第29页 |
| ·cDNA合成的反应 | 第29页 |
| ·普通PCR扩增检测样品质量以及引物的特异性 | 第29页 |
| ·Real-time PCR检测RDV-P8 mRNA的转录动态 | 第29-30页 |
| ·标准模板的定量检测 | 第29页 |
| ·待测样品相对拷贝数的测定 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-39页 |
| ·病毒的提纯及紫外吸收值测定 | 第30页 |
| ·FITC标记RDV抗体的紫外吸收值与F/P值 | 第30-31页 |
| ·水稻悬浮细胞的建立 | 第31-32页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导 | 第31-32页 |
| ·水稻悬浮细胞系的建立 | 第32页 |
| ·RDV/水稻细胞侵染系的建立 | 第32-33页 |
| ·RDV对水稻悬浮细胞侵染率的统计 | 第32-33页 |
| ·RDV在水稻悬浮细胞的表达周期 | 第33页 |
| ·接种后RDV的两个外壳蛋白表达量的时间变化 | 第33-34页 |
| ·接种RDV后的悬浮细胞总蛋白的SDS-PAGE电泳图谱 | 第33-34页 |
| ·Western blot的检测P8和P9蛋白的表达情况 | 第34页 |
| ·接种后RDV的S8和S9片段在细胞中的转录随时间的变化 | 第34-37页 |
| ·RDV病毒基因组的纯化验 | 第35页 |
| ·RT-PCR扩增结果及克隆结果 | 第35-36页 |
| ·Northern杂交结果 | 第36-37页 |
| ·实时荧光定量PCR检测RDV S8在水稻悬浮细胞内的转录动态 | 第37-39页 |
| ·引物的特异性检测结果 | 第37页 |
| ·目的片段的标准曲线建立 | 第37-39页 |
| ·各时间点细胞内RDV S8片段的mRNA的表达量变化 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-42页 |
| ·水稻悬浮细胞系建立的影响因素 | 第39-40页 |
| ·RDV对水稻悬浮细胞的侵染 | 第40页 |
| ·RDV在水稻悬浮细胞内的表达动态 | 第40-41页 |
| ·实时荧光定量PCR(real-time PCR)的应用 | 第41-42页 |
| 3 寄主细胞对病毒的一些生理反应 | 第42-50页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·病毒侵染悬浮细胞系的建立 | 第42页 |
| ·试验试剂与药品 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-44页 |
| ·感染RDV细胞的防御酶活性的测定 | 第43页 |
| ·过氧化物酶(POD)活性测定 | 第43页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定 | 第43页 |
| ·多酚氧化酶(PPO)活性测定 | 第43页 |
| ·水稻内源激素的提取 | 第43页 |
| ·高效液相色谱法测定 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·细胞防御酶活性的测定结果 | 第44-45页 |
| ·POD活性动态变化 | 第44页 |
| ·PAL活性动态变化 | 第44页 |
| ·PPO活性动态变化 | 第44-45页 |
| ·感染RDV的细胞内源激素的变化 | 第45-48页 |
| ·标准曲线线性关系的测定 | 第45-46页 |
| ·病毒侵染不同时间细胞内激素的变化动态 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
