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辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)皱缩坏死基因(PcCRN1、PcCRN2)功能研究

英文缩略词及中文对照表第1-10页
中文摘要第10-12页
Abstract第12-14页
1 引言第14-34页
   ·辣椒疫霉菌研究进展第14-18页
     ·辣椒疫病的发生危害及症状第14-15页
     ·辣椒疫霉菌的形态特征第15页
     ·辣椒疫霉菌的发病规律第15页
     ·辣椒疫霉的发病原因第15-16页
       ·与病残体的关系第15页
       ·与环境因子的关系第15-16页
       ·不同病菌菌株与致病性的关系第16页
       ·其他因素第16页
     ·辣椒疫病的防治技术第16-18页
       ·农业防治第16-17页
       ·物理防治第17页
       ·化学防治第17页
       ·生物防治第17-18页
     ·辣椒疫霉菌的基因组学研究第18页
   ·卵菌效应蛋白(effectors)的研究进展第18-28页
     ·基因对基因假说第19-20页
     ·效应蛋白的发现第20页
     ·卵菌中效应蛋白的研究第20-28页
       ·卵菌中效应蛋白的确认第20-21页
       ·卵菌质外体效应蛋白的研究第21-23页
       ·卵菌胞质效应蛋白的研究第23-24页
       ·卵菌效应蛋白的特点第24-27页
       ·卵菌效应蛋白的国内最新成果第27-28页
   ·皱缩坏死蛋白(crinkling and necrosis protein)的研究进展第28-29页
     ·皱缩坏死基因(CRN)的发现第28页
     ·皱缩坏死基因(CRN)序列特点第28页
     ·皱缩坏死基因(CRN)研究概况第28-29页
   ·PVX 介导的农杆菌瞬时表达系统第29-30页
     ·病毒载体的建立第29页
     ·农杆菌概况第29-30页
     ·农杆菌介导的瞬时表达第30页
     ·转化农杆菌的方法第30页
   ·基因沉默第30-32页
     ·卵菌转化技术和基因沉默第31页
     ·基因沉默类型第31页
     ·基因沉默机制第31-32页
   ·荧光定量PCR(qRT-PCR)第32-33页
   ·实验目的及意义第33-34页
2 材料与方法第34-53页
   ·实验材料第34-36页
     ·常用的菌株、载体与质粒第34页
     ·常用试剂第34页
     ·相关耗材和仪器第34-35页
     ·常用培养基及有关溶液的配制第35-36页
   ·实验方法第36-53页
     ·生物信息学分析第36-37页
       ·皱缩坏死蛋白基因的筛选第36页
       ·筛选的序列进行在线比对第36页
       ·信号肽预测第36-37页
     ·基因克隆与分离第37-40页
       ·提取辣椒疫霉菌丝RNA第37页
       ·反转录cDNA 第一链的合成第37-38页
       ·PCR 验证CRN 基因是否为真基因第38-39页
       ·PcCRN1 基因的克隆第39-40页
       ·同源性分析第40页
     ·基因的初期表达量检测第40-43页
       ·诱导游动孢子第40-41页
       ·辣椒组织RNA 提取第41页
       ·反转录cDNA 第一链的合成第41页
       ·荧光定量PCR第41-43页
     ·基因保守位点的突变第43页
     ·表达载体的构建第43-48页
       ·PVX 表达载体的构建第44-47页
       ·pHam34 载体的构建第47-48页
     ·农杆菌瞬时表达第48-49页
       ·农杆菌感受态细胞制备第48页
       ·液氮冻融法转化农杆菌第48-49页
       ·农杆菌接种第49页
     ·PEG 介导的原生质体转化第49-53页
       ·辣椒疫霉的活化培养第49页
       ·原生质体转化步骤第49-51页
       ·RT-PCR 检测第51页
       ·荧光定量PCR 检测第51-52页
       ·致病性检测第52页
       ·生物学性状观察第52-53页
3 结果与讨论第53-74页
   ·实验结果第53-70页
     ·PcCRN1 和PcCRN2 生物信息学分析结果第53-56页
       ·辣椒疫霉中CRN 基因的特点第53-55页
       ·98651 和21733 信号肽预测第55-56页
     ·基因克隆第56-61页
       ·RT-PCR 验证第56-57页
       ·基因克隆第57-60页
       ·同源性分析第60-61页
     ·辣椒疫霉菌中CRN 基因初期表达量第61页
     ·保守位点的突变第61-63页
     ·载体构建第63-64页
       ·PVX 载体构建第63-64页
       ·pHam34 载体构建第64页
     ·农杆菌接种第64-67页
       ·转化农杆菌验证第64-65页
       ·农杆菌接种症状观察第65-67页
     ·基因沉默第67-70页
       ·原生质体的制备第67-68页
       ·RT-PCR 验证第68页
       ·荧光定量PCR 验证第68-69页
       ·致病性检测第69页
       ·形态学观察第69-70页
   ·讨论第70-74页
     ·基因的筛选和克隆第70-71页
     ·初期表达水平检测第71页
     ·PcCRN1 和 PcCRN2 及突变基因的功能体外检测第71-72页
     ·PcCRN1 和 PcCRN2 的沉默第72页
     ·植物免疫反应第72-74页
4 结论与建议第74-76页
   ·结论第74-75页
   ·建议第75-76页
5 参考文献第76-84页
6 附录第84-85页
7 致谢第85-86页
8 攻读学位期间发表论文情况第86-87页
硕士学位论文内容简介及自评第87页

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