| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-37页 |
| 1 无脊椎动物的先天性免疫系统 | 第12-32页 |
| ·细胞免疫 | 第14-15页 |
| ·吞噬作用 | 第14页 |
| ·包裹作用 | 第14页 |
| ·结节形成 | 第14-15页 |
| ·体液免疫 | 第15-32页 |
| ·TOLL 通路 | 第18-22页 |
| ·Imd 通路 | 第22-24页 |
| ·免疫效应分子 | 第24-32页 |
| 2. 我国栉孔扇贝养殖业面临的问题及解决策略 | 第32-35页 |
| ·栉孔扇贝抗菌肽研究的现状及开展本研究的立论依据 | 第34-35页 |
| 3. 本研究的目的和意义 | 第35-37页 |
| 第二章 栉孔扇贝核心组蛋白群基因的克隆 | 第37-60页 |
| ·材料和方法 | 第38-46页 |
| ·Genomic Walking 文库的构建 | 第38-41页 |
| ·基因组DNA 的提取方法 | 第38-39页 |
| ·DNA 样品的检测 | 第39页 |
| ·基因组DNA 的酶切 | 第39页 |
| ·酶切DNA 片段的纯化 | 第39-40页 |
| ·DNA 片段与接头（adaptor）的连接 | 第40-41页 |
| ·引物设计 | 第41-42页 |
| ·PCR 反应 | 第42-43页 |
| ·琼脂糖凝胶纯化PCR 产物 | 第43页 |
| ·纯化产物与T 载体的连接 | 第43页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第43-44页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44页 |
| ·质粒的制备 | 第44-45页 |
| ·测序分析扩增片断 | 第45页 |
| ·全长序列的拼接及生物信息学分析 | 第45页 |
| ·分子系统进化分析 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-58页 |
| ·基因组文库的构建 | 第46-47页 |
| ·全长组蛋白聚群的克隆 | 第47页 |
| ·定性组蛋白基因聚群 | 第47-53页 |
| ·H2A 和H2B 的进化分析 | 第53-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第三章 栉孔扇贝H2A 的N 末端潜在的抗菌肽的研究 | 第60-76页 |
| ·材料与方法 | 第61-70页 |
| ·实验样品及样品处理 | 第61-62页 |
| ·细菌培养基的配制 | 第62-63页 |
| ·扇贝总 RNA 提取 | 第63页 |
| ·实验用品的预处理 | 第63页 |
| ·扇贝总RNA 提取 | 第63页 |
| ·扇贝cDNA 模板第一链的合成 | 第63-64页 |
| ·RT-PCR 检测目的基因的表达 | 第64-65页 |
| ·H2A 的N 末端多肽抗菌活性的生物信息学分析 | 第65页 |
| ·重组质粒的构建 | 第65-66页 |
| ·真核重组表达H2A 的N 末端多肽 | 第66-70页 |
| ·毕赤酵母用培养基 | 第66-68页 |
| ·转化及整合 | 第68-69页 |
| ·PCR 法分析毕赤酵母整合 | 第69页 |
| ·高拷贝重组子的筛选 | 第69页 |
| ·重组产物的诱导表达 | 第69-70页 |
| ·重组表达产物的电泳检测 | 第70页 |
| ·琼脂扩散法检测重组产物的抗菌活性 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-74页 |
| ·H2A 的N 末端多肽的定性 | 第70-71页 |
| ·H2A 基因的半定量RT-PCR 分析 | 第71-72页 |
| ·H2A 的N 末端多肽在毕赤酵母中的表达及活性分析 | 第72-73页 |
| ·定性重组产物 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 参与组蛋白H2A 特异性剪切的组织蛋白酶D 基因的克隆与序列分析 | 第76-83页 |
| ·材料和方法 | 第76-79页 |
| ·cDNA 文库的构建及序列分析 | 第76-77页 |
| ·cDNA 文库的构建 | 第76-77页 |
| ·序列分析与目的基因片段的获得 | 第77页 |
| ·引物设计 | 第77页 |
| ·PCR 反应 | 第77页 |
| ·全长序列的拼接及生物信息学分析 | 第77-78页 |
| ·分子系统进化分析 | 第78-79页 |
| ·结果与讨论 | 第79-83页 |
| ·栉孔扇贝组织蛋白酶D 全长cDNA 的克隆 | 第79-80页 |
| ·序列分析栉孔扇贝组织蛋白酶D | 第80-81页 |
| ·栉孔扇贝组织蛋白酶D 的系统进化分析 | 第81-83页 |
| 博士期间的其他研究工作 | 第83-104页 |
| 第五章 中华绒螯蟹抗脂多糖因子基因的克隆、表达和功能分析 | 第84-104页 |
| ·材料与方法 | 第85-95页 |
| ·实验样品及样品处理 | 第85页 |
| ·cDNA 文库的构建及序列分析 | 第85-86页 |
| ·3' RACE 扩增 | 第86页 |
| ·5' RACE 扩增 | 第86-87页 |
| ·河蟹抗脂多糖因子全长cDNA 的克隆 | 第87-88页 |
| ·Northern 分析 | 第88-90页 |
| ·探针制备 | 第88页 |
| ·甲醛凝胶电泳 | 第88-89页 |
| ·转膜 | 第89页 |
| ·紫外交联 | 第89页 |
| ·预杂交和杂交 | 第89页 |
| ·洗膜 | 第89页 |
| ·检测 | 第89-90页 |
| ·QRT-PCR 检测目的基因的表达 | 第90-92页 |
| ·重组质粒的构建 | 第92-93页 |
| ·重组蛋白的电泳检测、纯化及复性 | 第93-94页 |
| ·重组蛋白的电泳检测 | 第93页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第93-94页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第94页 |
| ·重组蛋白的杀菌活性分析 | 第94-95页 |
| ·结果 | 第95-101页 |
| ·河蟹抗脂多糖因子全长cDNA 的克隆 | 第95页 |
| ·河蟹抗脂多糖因子基因EsALF 的核苷酸序列分析 | 第95-96页 |
| ·河蟹抗脂多糖因子基因EsALF 的同源性分析 | 第96-98页 |
| ·河蟹抗脂多糖因子EsALF 基因的组织分布 | 第98-99页 |
| ·用实时定量PCR 检测鳗弧菌刺激下EsALF 基因的时序表达 | 第99-100页 |
| ·河蟹抗脂多糖因子的重组表达和电泳分析 | 第100页 |
| ·重组蛋白的杀菌活性分析 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-104页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 下一步工作设想 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-122页 |
| 博士期间发表和完成的论文 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
