| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1.前言 | 第10-32页 |
| ·细胞色素P450 | 第10-20页 |
| ·细胞色素P450概述 | 第10-11页 |
| ·细胞色素P450的多样性 | 第11-13页 |
| ·细胞色素P450分布的多样性 | 第11页 |
| ·细胞色素P450结构的多样性 | 第11-12页 |
| ·细胞色素P450功能的多样性 | 第12-13页 |
| ·细胞色素P450的结构特征 | 第13-15页 |
| ·细胞色素P450的重要生物学意义 | 第15-16页 |
| ·细胞色素P450与固醇类激素的生物合成 | 第15-16页 |
| ·细胞色素P450与外源物质的代谢 | 第16页 |
| ·细胞色素P450的应用 | 第16-20页 |
| ·细胞色素P450在医学中的应用 | 第16-18页 |
| ·细胞色素P450在农业中的应用 | 第18-19页 |
| ·细胞色素P450在环境治理中的应用 | 第19-20页 |
| ·真菌细胞色素P450nor | 第20-26页 |
| ·真菌细胞色素P450nor的发现及种类 | 第20-21页 |
| ·真菌细胞色素P450nor的催化机制 | 第21-22页 |
| ·真菌细胞色素P450nor的结构 | 第22-24页 |
| ·真菌细胞色素P450nor与反硝化 | 第24-25页 |
| ·NO与细胞色素P450nor | 第25-26页 |
| ·细胞色素P450基因的异源表达 | 第26-30页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第26-28页 |
| ·密码子的选用 | 第27页 |
| ·SD序列 | 第27-28页 |
| ·重组细胞色素P450在大肠杆菌中的表达 | 第28页 |
| ·杆状病毒介导的昆虫细胞表达系统 | 第28-29页 |
| ·酵母表达系统 | 第29-30页 |
| ·细胞色素P450的发展前景及待解决的问题 | 第30-31页 |
| ·本研究的立题依据及意义 | 第31-32页 |
| 2.实验材料和方法 | 第32-40页 |
| ·实验材料 | 第32-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·化学试剂及抗菌素 | 第32页 |
| ·常用贮存液 | 第32页 |
| ·限制性内切酶及其它工具酶 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·常用缓冲液 | 第33-35页 |
| ·Ni-NTA亲和层析柱 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-40页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·细胞色素P450nor的克隆 | 第36页 |
| ·DNA限制性内切酶消化 | 第36页 |
| ·DNA片段的回收 | 第36页 |
| ·DNA片段的连接 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第37页 |
| ·原核细胞中重组质粒的筛选 | 第37页 |
| ·酵母感受态细胞的制备和转化 | 第37-38页 |
| ·菌落PCR鉴定重组酵母细胞 | 第38页 |
| ·蛋白质的原核表达 | 第38页 |
| ·蛋白质的真核表达 | 第38-39页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第39页 |
| ·目的蛋白的大量制备 | 第39页 |
| ·Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质 | 第39-40页 |
| 3.实验结果 | 第40-50页 |
| ·重组质粒pBlue-p450nor的构建和表达 | 第40-42页 |
| ·细胞色素P450nor的克隆 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pBlue-p450nor的构建 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pBlue-p450nor的鉴定 | 第42页 |
| ·重组表达质粒pET-p450nor的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒pET-p450nor的构建 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒pET-p450nor的鉴定 | 第43页 |
| ·P450nor基因在大肠杆菌BL21中的表达与鉴定 | 第43页 |
| ·原核表达的细胞色素P450nor的分离纯化 | 第43-45页 |
| ·重组细胞色素P450nor的分离纯化 | 第43页 |
| ·重组细胞色素P450nor纯化效果的鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组穿梭质粒pAUR123-p450nor的构建和鉴定 | 第45-48页 |
| ·重组穿梭质粒pAUR123-p450nor的构建 | 第45-46页 |
| ·重组穿梭质粒pAUR123-p450nor的鉴定 | 第46-48页 |
| ·酵母转化及阳性克隆的筛选 | 第48页 |
| ·P450nor基因在酿酒酵母(S.cerevisiae)AH22中的表达与鉴定 | 第48-50页 |
| 4.讨论 | 第50-53页 |
| ·高效表达载体pET-28 | 第50页 |
| ·重组细胞色素pET-p450nor的高效表达 | 第50-51页 |
| ·培养条件对蛋白表达量的影响 | 第51-52页 |
| ·温度对重组细胞色素P450nor表达的影响 | 第51页 |
| ·IPTG浓度对重组细胞色素P450nor表达的影响 | 第51-52页 |
| ·培养基对酵母表达量的影响 | 第52页 |
| ·菌落PCR扩增参数的确定 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
