| 目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-38页 |
| 1 课题的提出 | 第15页 |
| 2 线虫的类型 | 第15-18页 |
| ·活动性外寄生线虫 | 第16页 |
| ·固着性外寄生线虫 | 第16页 |
| ·活动性内-外寄生线虫 | 第16-17页 |
| ·活动性内寄生线虫 | 第17页 |
| ·固着性内寄生线虫 | 第17-18页 |
| 3 线虫的危害 | 第18-21页 |
| ·线虫食道腺分泌物在致病中的重要作用 | 第19-20页 |
| ·线虫与其他病原相互作用 | 第20-21页 |
| 4 蔬菜根结线虫病的症状及加重的原因 | 第21-22页 |
| ·蔬菜根结线虫病的症状 | 第21页 |
| ·蔬菜根结线虫病加重的原因 | 第21-22页 |
| ·蔬菜种植面积加大,复种指数增加 | 第21-22页 |
| ·保护地种植面积迅速扩大 | 第22页 |
| ·茬口安排不当 | 第22页 |
| ·使用带病菜苗,使发病面积迅速扩大,病情加重 | 第22页 |
| ·防治方法单一,菜农片面追求化学防治 | 第22页 |
| 5 生产上对根结线虫的防治 | 第22-24页 |
| ·农业措施 | 第23页 |
| ·物理防治 | 第23页 |
| ·化学防治 | 第23页 |
| ·生物防治 | 第23-24页 |
| 6 植物抗病基因的研究进展 | 第24-33页 |
| ·植物抗病基因的克隆方法 | 第24-31页 |
| ·功能克隆——根据植物基因表达的产物蛋白质克隆基因 | 第25页 |
| ·定位克隆——根据连锁图谱定位基因来克隆植物基因 | 第25-26页 |
| ·转座子标签法(Transposon Tagging) | 第26页 |
| ·抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH) | 第26-27页 |
| ·基因芯片技术(Gene Chips) | 第27-28页 |
| ·同源序列法——根据基因的已知同源序列克隆基因 | 第28-31页 |
| ·抗病基因的类型 | 第31-33页 |
| 7 生物技术在抗线虫上的应用 | 第33-36页 |
| ·利用生物技术的抗线虫策略 | 第33-34页 |
| ·植物抗体策略 | 第33页 |
| ·蛋白酶抑制剂策略 | 第33-34页 |
| ·抗线虫取食位点策略 | 第34页 |
| ·抗线虫基因的克隆 | 第34-36页 |
| 8 本研究的目的和内容 | 第36-38页 |
| 第二章 番茄抗根结线虫基因SlMi的克隆与鉴定 | 第38-69页 |
| 1 前言 | 第38-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-48页 |
| ·植物材料、菌株、质粒、试剂 | 第40页 |
| ·SlMi基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·SlMi基因的表达分析 | 第41-42页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第42-45页 |
| ·正义(超量)表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·RNAi抑制表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·番茄遗传转化 | 第45-46页 |
| ·转基因番茄植株的分子检测 | 第46-47页 |
| ·转基因番茄植株的PCR检测 | 第46页 |
| ·转基因番茄植株的Southern杂交分析 | 第46-47页 |
| ·转基因番茄植株的RT-PCR分析 | 第47页 |
| ·转化植株的抗性评价 | 第47页 |
| ·根部组织石蜡切片观察 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-66页 |
| ·番茄抗性材料的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·SlMi基因的克隆与序列分析 | 第49-51页 |
| ·SlMi基因在番茄不同器官中的表达分析 | 第51-52页 |
| ·SlMi基因植物表达载体的构建 | 第52-55页 |
| ·SlMi基因正义植物表达载体的获得 | 第52-54页 |
| ·RNAi抑制表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·转基因植株的获得 | 第55-56页 |
| ·转基因番茄植株的分子检测 | 第56-60页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第56-57页 |
| ·转基因植株的Southern杂交分析 | 第57-59页 |
| ·转基因植株的RT-PCR分析 | 第59-60页 |
| ·SlMi基因的正义转基因植株的RT-PCR分析 | 第59-60页 |
| ·SlMi基因的RNAi转基因植株的RT-PCR分析 | 第60页 |
| ·转基因植株根结线虫抗性鉴定 | 第60-63页 |
| ·转正义SlMi基因植株根结线虫抗性评价 | 第60-62页 |
| ·转RNAi植株根结线虫抗性评价 | 第62-63页 |
| ·根部石蜡切片观察结果 | 第63-64页 |
| ·转基因植株后代的遗传分析 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| ·基因克隆过程中的问题 | 第66页 |
| ·转基因植株抗根结线虫的效果 | 第66-67页 |
| ·转基因沉默现象 | 第67页 |
| ·RNAi对内源基因的抑制 | 第67-69页 |
| 第三章 辣椒抗根结线虫基因的克隆与鉴定 | 第69-94页 |
| 1 前言 | 第69-71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-76页 |
| ·植物材料 | 第71页 |
| ·菌株、质粒及试剂 | 第71页 |
| ·辣椒总DNA的提取 | 第71页 |
| ·简并引物的设计及PCR扩增 | 第71-73页 |
| ·阳性克隆的鉴定、测序及序列分析 | 第73页 |
| ·CaMi基因的克隆与序列分析 | 第73-74页 |
| ·正义(超量)表达载体的构建 | 第74页 |
| ·3’RACE扩增 | 第74-75页 |
| ·Southern杂交分析 | 第75页 |
| ·RT-PCR分析 | 第75页 |
| ·番茄遗传转化 | 第75页 |
| ·转基因植株的分子鉴定及根结线虫抗性评价 | 第75-76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-91页 |
| ·辣椒RGAs的分离与克隆 | 第76页 |
| ·辣椒RGAs阳性克隆测序及序列聚类分析 | 第76-78页 |
| ·辣椒RGAs与已知的植物抗病基因相应区域的氨基酸序列相似性比较 | 第78页 |
| ·CaMi基因的克隆 | 第78-81页 |
| ·3’RACE | 第81页 |
| ·正义(超量)表达载体的构建 | 第81-82页 |
| ·CaMi基因的序列分析 | 第82-84页 |
| ·CaMi基因与Mi基因的比较 | 第84-86页 |
| ·CaMi基因在辣椒基因组中的分布 | 第86页 |
| ·CaMi基因在辣椒不同组织中的表达分析 | 第86-87页 |
| ·CaMi转基因番茄植株的获得 | 第87页 |
| ·转基因番茄植株的分子检测 | 第87-88页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第87页 |
| ·CaMi转基因番茄植株的Southern杂交分析 | 第87-88页 |
| ·转基因植株的RT-PCR分析 | 第88页 |
| ·转基因植株的抗性评价 | 第88-91页 |
| 4 讨论 | 第91-94页 |
| ·抗病基因的克隆 | 第91-92页 |
| ·CaMi与Mi基因的关系 | 第92页 |
| ·CaMi基因与已定位的辣椒抗根结线虫基因的关系 | 第92-93页 |
| ·CaMi基因的利用前景 | 第93-94页 |
| 第四章 讨论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 附录 | 第113-133页 |
| 附录一:植物DNA的小量法提取程序 | 第113-114页 |
| 附录二:TriZOL一步法提取植物总RNA方法 | 第114-115页 |
| 附录三:质粒的小量提取方法 | 第115-116页 |
| 附录四:Southern Blotting程序 | 第116-120页 |
| 附录五:24个RGAs的核苷酸及氨基酸序列 | 第120-127页 |
| 附录六:登记基因信息 | 第127-132页 |
| 附录七:质粒图 | 第132-133页 |
| 附录八:博士在读期间已接受的文章及会议论文摘要 | 第133页 |
