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水稻逆境相关转录因子的分离和功能鉴定

缩写名词表第1-10页
摘要第10-12页
Abstract第12-15页
1 文献综述第15-42页
   ·植物在非生物逆境下的应答反应第15-17页
   ·不同逆境下植物的生理变化和抗逆性评价第17-19页
   ·转录因子研究概况第19-31页
     ·转录因子概念及结构特征第19-21页
     ·转录因子的分类及功能第21-23页
     ·与逆境相关的转录因子的研究进展第23-31页
       ·AP2/EREBP第23-26页
       ·bZIP转录因子第26-27页
       ·Zinc finger转录因子第27-28页
       ·MYB/MYC转录因子第28页
       ·NAC转录因子第28-31页
   ·转录因子在逆境抗性基因工程中的应用第31-32页
   ·植物基因功能研究策略第32-37页
     ·基因功能丧失方法(Loss of function)第33-35页
       ·反义抑制和共抑制第33页
       ·插入突变第33-34页
       ·RNA干扰(RNAi)第34-35页
     ·基因功能增加方法第35-36页
       ·超量表达(Over-expression)第36页
       ·基因诱导表达(Inducible expression)第36页
     ·DNA Microarray第36-37页
     ·酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)第37页
   ·选择标记基因在转基因植物中的研究进展第37-41页
     ·农杆菌介导的遗传转化系统和抗性标记基因的使用第37-38页
     ·现有抗性标记基因的不足第38-39页
     ·无标记筛选转基因植株的技术第39-40页
     ·安全标记基因的应用第40-41页
   ·本研究的目的和意义第41-42页
2 材料与方法第42-55页
   ·水稻材料第42页
   ·用于遗传转化的水稻基因片段第42页
   ·实验所用到的菌株、质粒、载体和感受态细胞第42页
   ·DNA的抽提和Southern杂交第42-44页
   ·RNA的抽提,反转录和Northern杂交第44页
   ·水稻内源基因表达量分析的材料准备第44页
   ·遗传转化载体的构建和转化第44-47页
     ·超量表达载体的构建第44-45页
     ·RNAi抑制表达载体的构建第45-46页
     ·GFP融合表达载体的构建第46-47页
     ·遗传转化第47页
   ·目标蛋白的亚细胞定位分析第47-48页
     ·通过遗传转化分析目标蛋白的亚细胞定位第47页
     ·通过瞬时表达分析目标蛋白的亚细胞定位第47-48页
   ·酵母细胞中的生化实验第48-49页
     ·转录因子在酵母中的反式激活实验第48-49页
     ·酵母单杂交实验第49页
   ·GFP的表达观察第49页
   ·GUS组织化学分析和GUS活性测定第49-50页
   ·成株期转基因植株在大田和PVC管的抗旱实验第50-51页
   ·SNAC1超量表达转基因植株叶片电镜观察第51-52页
   ·SNAC1超量表达转基因植株在干旱胁迫下的相对含水量第52页
   ·SNAC1超量表达转基因植株光合速率和蒸腾速率的测量第52页
   ·转基因植株的ABA敏感性实验第52页
   ·转基因植株苗期抗逆性实验第52-54页
     ·转基因植株苗期抗旱性分析第52-53页
     ·转基因植株苗期耐盐性分析第53-54页
       ·SNAC1转基因家系的耐盐性实验分析第53-54页
       ·SNAC2转基因家系的耐盐性实验分析第54页
   ·转基因植株苗期耐冷性实验第54页
   ·转基因植株的基因表达谱分析第54-55页
3 结果与分析第55-125页
   ·目标基因的分离和遗传转化载体的构建第55-57页
   ·遗传转化和转基因植株的阳性检测第57-58页
   ·转基因植株的拷贝数和表达量检测第58-59页
   ·田间T_1代转基因植株抗旱筛选第59-62页
     ·T_1代转基因植株苗期抗旱筛选第59-61页
     ·T_1代转基因植株成株期抗旱筛选第61-62页
   ·SNAC1基因的功能研究及抗逆性分析第62-99页
     ·SNAC1基因的扩增和序列分析第62-66页
     ·SNAC1的表达模式分析第66-68页
       ·SNAC1在非生物逆境的表达量分析第66页
       ·SNAC1在不同组织的表达模式第66-68页
     ·SNAC1亚细胞定位分析第68-69页
     ·SNAC1在酵母细胞的生化功能第69-72页
       ·SNAC1具有反式激活功能第69-71页
       ·SNAC1能结合类似NACRS的序列第71-72页
     ·SNAC1超量表达载体的遗传转化和表达量及拷贝数的检测第72-73页
     ·SNAC1超量表达转基因植株成株期抗逆性分析第73-80页
       ·SNAC1转基因植株正常条件下的农艺性状测量第73-74页
       ·SNAC1转基因植株成株期的抗旱性鉴定第74-75页
       ·SNAC1转基因植株的抗旱性共分离检测第75-76页
       ·SNAC1转基因植株干旱胁迫下相对含水量的动态变化第76-77页
       ·SNAC1转基因植株的气孔开闭观察第77-79页
       ·SNAC1转基因植株正常条件下的光合速率和蒸腾速率第79-80页
     ·苗期SNAC1转基因植株抗逆性分析第80-86页
       ·苗期SNAC1转基因植株抗旱性分析第80-81页
       ·土培条件下SNAC1转基因植株苗期的耐盐性分析第81-82页
       ·水培条件下SNAC1转基因植株苗期的耐盐性分析第82-85页
       ·SNAC1转基因家系愈伤的耐盐性分析第85-86页
     ·SNAC1超量表达转基因植株的ABA敏感性分析第86-87页
     ·SNAC1抑制表达转基因植株的抗旱性分析第87-88页
     ·SNAC1超量表达转基因植株的基因表达谱分析第88-97页
     ·SNAC1转基因水稻和NACs转基因拟南芥的表达谱比较第97-99页
   ·SNAC2基因的功能研究与抗逆性分析第99-113页
     ·SNAC2基因的序列分析第99-100页
     ·SNAC2的表达模式分析第100-103页
       ·SNAC2在非生物逆境的表达量分析第100页
       ·SNAC2在苗期水稻不同组织的表达模式第100-102页
       ·SNAC2的启动子活性分析第102-103页
     ·SNAC2亚细胞定位分析第103-104页
     ·SNAC2蛋白在酵母细胞的生化功能第104-106页
       ·SNAC2具有反式激活功能第104页
       ·SNAC2能识别类似的NACRS的序列第104-106页
     ·SNAC2超量表达和诱导表达载体的遗传转化和表达量分析第106-108页
     ·SNAC2转基因植株苗期抗逆性分析第108-112页
       ·SNAC2转基因植株苗期抗旱性分析第108页
       ·SNAC2转基因家系高盐环境中的发芽率第108-109页
       ·SNAC2转基因植株苗期耐盐性分析第109-110页
       ·SNAC2转基因植株苗期耐冷性分析第110-112页
     ·SNAC2转基因植株的ABA敏感性分析第112-113页
   ·T052基因的功能分析第113-118页
     ·T052基因的扩增和序列分析第113页
     ·T052的表达模式分析第113-115页
       ·T052在非生物逆境的表达量分析第113-114页
       ·T052在不同组织的表达模式第114-115页
     ·T052启动子序列在籼粳稻之间存在差异第115-116页
     ·MYB蛋白T052定位在细胞核第116页
     ·MYB蛋白具有反式激活功能第116-117页
     ·SNAC1能识别MYB基因T052启动子区第117-118页
   ·水稻抗逆基因应用性遗传转化载体的构建第118-125页
     ·pSMDP01遗传转化载体的构建第118-121页
     ·pSMDP02遗传转化载体的构建第121-124页
     ·转化载体筛选条件的摸索第124-125页
4 讨论第125-136页
   ·SNAC1基因功能的探讨第125-130页
     ·SNAC1具有转录因子的特性第125页
     ·SNAC1在抗旱遗传改良中的有效性第125-126页
     ·SNAC1提高植株抗旱性的几种抗旱途径第126-129页
     ·SNAC1介导的耐盐性增强可能是一种新的耐盐机制第129-130页
     ·在水稻和拟南芥中不同的NAC介导不同的抗逆途径第130页
   ·SNAC2基因功能的探讨第130-132页
   ·T052基因功能的探讨第132-133页
   ·遗传转化载体pSMDP01和pSMDP02的应用前景第133-134页
   ·关于后续工作的设想第134-136页
参考文献第136-152页
致谢第152-153页
附录 A第153-160页
附录 B第160-161页

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